Если мутация, вызывающая то или иное наследственное заболевание, изменяет сайт рестрикции для определенной рестриктазы, то для прямой диагностики может быть использован метод анализа ПДРФ (полиморфизм длины рестрикционных фрагментов) (рис. 5.9).

Недостатком метода анализа ПДРФ является то, что мутации, вызывающие моногенные заболевания, изменяют или удаляют сайт рестрикции для разных ре-стриктаз в относительно небольшом проценте случаев.

Если последовательность нуклеотидов, предшествующих мутации и следующих за мутацией, известна, то для прямой диагностики мутации могут быть использованы олигонуклео-тидные зонды, которые будут гибридизоваться только либо с мутантной, либо с нормальной последовательностью нуклеотидов. Эти олигонуклеотидные зонды получили название аллельспецифических олигонуклеотидов (АСО).

Аллельспецифические олигонуклеотиды гибридизируются с геномной ДНК в жестких условиях, поэтому нарушение спаривания даже одного нуклеотида будет препятствовать гибридизации. Обычно длина АСО составляет 18—20 нуклеотидов.

Более короткие зонды могут быть не уникальными для генома. Представим олигонуклеотидные аллельспецифические последовательности для нормальной и мутантной ДНК и результаты их гибридизации с нормальными и мутантными гомозиготами, а также с гетерозиготами, которые приводят к образованию гомо- и гетеродуплексов, различимых при элетрофорезе.

- Вернуться в оглавление раздела "Генетика. Медицинская генетика."