Советуем для ознакомления:

Разделы генетики:

Популярные разделы сайта:

Оглавление темы "Наследственные кожные заболевания.":
1. Наследственные кожные заболевания. Буллезный эпидермолиз простой тип Кобнера. Буллезный эпидермолиз простой тип Доулинг—Мейра. Буллезный эпидермолиз претибиальный
2. Буллезный эпидермолиз дистрофический тип Пазини. Буллезный эпидермолиз дистрофический тип Галлопе—Сименса. Буллезный эпидермолиз летальный.
3. Буллезный эпидермолиз тип Дисентис. Буллезный эпидермолиз летальный с атрезией пилоруса. Гиперкератоз локальный эпидермолитический
4. Неэпидермолитический ладонноподошвенный гиперкератоз. Врожденная пахионихия тип Ядассона—Левандовского. Ихтиозиформная эритродерма врожденная тип Брока
5. Молекулярная диагностика наследственных заболеваний. Анализ ДНК. ДНК диагностика.
6. Метод анализа ПДРФ. Полиморфизм длины рестрикционных фрагментов. Аллельспецифические олигонуклеотиды.

Метод анализа ПДРФ. Полиморфизм длины рестрикционных фрагментов. Аллельспецифические олигонуклеотиды.

Если мутация, вызывающая то или иное наследственное заболевание, изменяет сайт рестрикции для определенной рестриктазы, то для прямой диагностики может быть использован метод анализа ПДРФ (полиморфизм длины рестрикционных фрагментов) (рис. 5.9).

Недостатком метода анализа ПДРФ является то, что мутации, вызывающие моногенные заболевания, изменяют или удаляют сайт рестрикции для разных ре-стриктаз в относительно небольшом проценте случаев.

Метод анализа ПДРФ. Полиморфизм длины рестрикционных фрагментов. Аллельспецифические олигонуклеотиды
Рис. 5.9. Прямой метод ДНК-диагностики мутации с помощью ПДРФ. В результате мутации в гене исчезает сайт рестрикции для определенной рестриктазы. Это выявляется с помощью анализа длины фрагментов нормальной и мутантной ДНК после рестрикции, электрофореза и гибридизации с зондом на соответствующий ген по Саузерну.

Если последовательность нуклеотидов, предшествующих мутации и следующих за мутацией, известна, то для прямой диагностики мутации могут быть использованы олигонуклео-тидные зонды, которые будут гибридизоваться только либо с мутантной, либо с нормальной последовательностью нуклеотидов. Эти олигонуклеотидные зонды получили название аллельспецифических олигонуклеотидов (АСО).

Аллельспецифические олигонуклеотиды гибридизируются с геномной ДНК в жестких условиях, поэтому нарушение спаривания даже одного нуклеотида будет препятствовать гибридизации. Обычно длина АСО составляет 18—20 нуклеотидов.

Метод анализа ПДРФ. Полиморфизм длины рестрикционных фрагментов. Аллельспецифические олигонуклеотиды

Более короткие зонды могут быть не уникальными для генома. Представим олигонуклеотидные аллельспецифические последовательности для нормальной и мутантной ДНК и результаты их гибридизации с нормальными и мутантными гомозиготами, а также с гетерозиготами, которые приводят к образованию гомо- и гетеродуплексов, различимых при элетрофорезе.

- Вернуться в оглавление раздела "Генетика. Медицинская генетика."