Советуем для ознакомления:

Разделы генетики:

Популярные разделы сайта:

Оглавление темы "Проект геном человека. Векторы.":
1. Синдром Беквита—Видемана. Причины синдрома беквита—видемана. Потеря импритинга.
2. Значение геномного импритинга. Наследственные заболевания и геномный импритинг.
3. Механизм импритинга. Модели смены эпигенотипа хромосом.
4. Проект геном человека. Технология рекомбинантных ДНК.
5. Клонирование ДНК. Этапы клонирования днк. Рестрикционные ферменты. Рестриктазы. Эндонуклеазы.
6. Рекомбинация фрагментов ДНК. Механизм рекомбинации днк. Рекомбинантная днк.
7. Векторы. Внедрение фрагментов ДНК в клетку хозяина с помощью векторов.
8. Плазмиды. Бактериофаги. Космида. Бактериальные искусственные хромосомы. Искусственные дрожжевые хромосомы.
9. Выявление клеток-хозяев на рекомбинантный вектор. Скрининг клеток-хозяев на рекомбинантный вектор. Саузерн-блоттинг.
10. Геномные библиотеки. Создание геномных библиотек. Типы геномных библиотек.

Клонирование ДНК. Этапы клонирования днк. Рестрикционные ферменты. Рестриктазы. Эндонуклеазы.

Клонирование ДНК in vivo включает 6 этапов:
1) получение фрагментов ДНК, в том числе генов или их частей с помощью ферментов рестрикции;
2) рекомбинация фрагментов,
3) вставка фрагмента ДНК в вектор;
4) трансформация с помощью вектора организма хозяина;
5) скрининг на рекомбинантный вектор
6) отбор интересующих исследователя клонов.

Некоторые рестриктазы, а также последовательности нуклеотидов, которые они распознают, и сайты рестрикции в этих последовательностях
Клонирование ДНК. Этапы клонирования днк. Рестрикционные ферменты. Рестриктазы. Эндонуклеазы.

Рестрикционные ферменты. Рестриктазы. Эндонуклеазы.

В каждой хромосоме человека имеется только одна непрерывная нить ДНК. Она сложно упакована для того, чтобы поместиться в хромосоме. Манипулировать с молекулой ДНК такой длины практически невозможно.

Поэтому открытие в 70-х годах XX в. особых бактериальных ферментов, разрезающих ДНК на отдельные фрагменты, было очень кстати. Ферменты были названы рестриктазами или эндонуклеазами.

У бактерий эти ферменты служат для защиты от проникновения в клетку чужеродной ДНК. Обычно рестриктазы распознают так называемые палиндромные последовательности нуклеотидов, наблюдающиеся в двух нитях ДНК и состоящие из 4—6 нуклеотидов.

«Палиндромные» означает одинаковые последовательности нуклеотидов, если их читать в одном и том же направлении, например от 5'- к 3'-концу в обеих комплементарных нитях ДНК.

Примеры нескольких рестриктаз показаны в таблице.

- Читать далее "Рекомбинация фрагментов ДНК. Механизм рекомбинации днк. Рекомбинантная днк."