Советуем для ознакомления:

Разделы генетики:

Популярные разделы сайта:

Оглавление темы "Проект геном человека. Векторы.":
1. Синдром Беквита—Видемана. Причины синдрома беквита—видемана. Потеря импритинга.
2. Значение геномного импритинга. Наследственные заболевания и геномный импритинг.
3. Механизм импритинга. Модели смены эпигенотипа хромосом.
4. Проект геном человека. Технология рекомбинантных ДНК.
5. Клонирование ДНК. Этапы клонирования днк. Рестрикционные ферменты. Рестриктазы. Эндонуклеазы.
6. Рекомбинация фрагментов ДНК. Механизм рекомбинации днк. Рекомбинантная днк.
7. Векторы. Внедрение фрагментов ДНК в клетку хозяина с помощью векторов.
8. Плазмиды. Бактериофаги. Космида. Бактериальные искусственные хромосомы. Искусственные дрожжевые хромосомы.
9. Выявление клеток-хозяев на рекомбинантный вектор. Скрининг клеток-хозяев на рекомбинантный вектор. Саузерн-блоттинг.
10. Геномные библиотеки. Создание геномных библиотек. Типы геномных библиотек.

Плазмиды. Бактериофаги. Космида. Бактериальные искусственные хромосомы. Искусственные дрожжевые хромосомы.

Плазмиды представляют собой кольцевую двунитевую ДНК, которая содержит гены резистентности к антибиотикам и тяжелым металлам.

Плазмиды располагаются внехромосомно в бактериальной клетке и стабильно наследуются. Обычно в плазмиде имеется несколько сайтов рестрикции для разных рестриктаз.

Гены устойчивости к антибиотикам плазмиды используют для отбора клонов, содержащих чужеродную ДНК. В плазмиду можно встроить до 10 тыс. п.н. чужеродной ДНК.

Бактериофаги

Бактериофаги — это бактериальные вирусы, содержащие ДНК в виде линейной двунитевой структуры со свисающими липкими концами, так называемые cos-последовательности.

Чаще в качестве векторов используют лямбда-фаги, в которые можно встроить до 40 тыс. п.н. чужеродной ДНК. Однако существуют фаги (например, Р1), в которые можно встроить до 100 тыс.п.н.

Плазмиды. Бактериофаги. Космида. Бактериальные искусственные хромосомы

Космида

Космида — это плазмида, из которой удалена часть ДНК для того, чтобы вставить больший по размерам фрагмент чужеродной ДНК, но оставлены гены, обеспечивающие ее размножение.

Бактериальные искусственные хромосомы

Бактериальные искусственные хромосомы. Плазмида фертильности у E.coli (так называемый F-фактор) способна включить фрагмент чужеродной ДНК размером до 300 тыс. п.н. Кроме того, она лучше сохраняет стабильность структуры чужеродной ДНК. Плазмида с чужеродной ДНК образует искусственную бактериальную хромосому, или ВАС. Комбинация из фага Р1 и F-фактора образует систему, которая называется РАС и способна вместить 150 тыс. п.н. чужеродной ДНК.

Искусственные дрожжевые хромосомы

Искусственные дрожжевые хромосомы (YAC) представлены плаз-мидой, в которую встроена последовательность ДНК. Из последней образуются центромера и теломера искусственной хромосомы, а также автономный центр репликации. В такую искусственную дрожжевую хромосому может быть вставлен фрагмент ДНК размером до 1000 тыс. п.н.

В искусственных хромосомах человека, как и в YAC, имеются центромера и теломера. Такая конструкция может включить до 10 млн п.н. Предполагают, что такая искусственная хромосома может встроиться в ядро, где она себя будет вести, как и другие хромосомы.

- Читать далее "Выявление клеток-хозяев на рекомбинантный вектор. Скрининг клеток-хозяев на рекомбинантный вектор. Саузерн-блоттинг."