Советуем для ознакомления:

Разделы генетики:

Популярные разделы сайта:

Оглавление темы "Проект геном человека. Векторы.":
1. Синдром Беквита—Видемана. Причины синдрома беквита—видемана. Потеря импритинга.
2. Значение геномного импритинга. Наследственные заболевания и геномный импритинг.
3. Механизм импритинга. Модели смены эпигенотипа хромосом.
4. Проект геном человека. Технология рекомбинантных ДНК.
5. Клонирование ДНК. Этапы клонирования днк. Рестрикционные ферменты. Рестриктазы. Эндонуклеазы.
6. Рекомбинация фрагментов ДНК. Механизм рекомбинации днк. Рекомбинантная днк.
7. Векторы. Внедрение фрагментов ДНК в клетку хозяина с помощью векторов.
8. Плазмиды. Бактериофаги. Космида. Бактериальные искусственные хромосомы. Искусственные дрожжевые хромосомы.
9. Выявление клеток-хозяев на рекомбинантный вектор. Скрининг клеток-хозяев на рекомбинантный вектор. Саузерн-блоттинг.
10. Геномные библиотеки. Создание геномных библиотек. Типы геномных библиотек.

Геномные библиотеки. Создание геномных библиотек. Типы геномных библиотек.

Рестрикция геномной ДНК на фрагменты и клонирование фрагментов с помощью различных векторов создали основу формирования геномных библиотек.

Для этого геномная ДНК разрезается или, как говорят, переваривается определенной рестриктазой, а образующиеся фрагменты клонируются с помощью различных векторов, для чего используют методы рекомбинантной ДНК. Геномная библиотека должна содержать не только гены, но и всю некодирующую ДНК, расположенную между генами.

Поскольку переваривание рестриктазой производят неполное так, что одни сайты, специфические для рестриктазы, разрезаются, а другие нет, то образуются фрагменты ДНК с частично перекрывающимися последовательностями нуклеотидов. Это облегчает последующее восстановление картины расположения фрагментов в нативной ДНК. Кроме геномных библиотек, существуют библиотеки кДНК.

Геномные библиотеки. Создание геномных библиотек. Типы геномных библиотек.

Библиотеки кДНК содержат только экзоны генов, поскольку получаются на основе зрелой мРНК с помощью фермента, называемого обратной транскриптазой. Обратная транскриптаза на матрице мРНК создает комплементарную нить ДНК, которая затем превращается в обычную двунитевую ДНК с помощью ДНК-полимеразы.

Затем такие молекулы кДНК клонируются в бактериальных клетках точно так же, как и геномная ДНК. Еще один тип ДНК-библиотек — хромосомоспецифические библиотеки.

Для их создания хромосомы разделяют с помощью проточной цитометрии, которая позволяет выделить отдельные хромосомы. ДНК, полученная после такой сортировки, будет преимущественно представлять определенную хромосому.

Затем получают фрагменты ДНК отдельной хромосомы перевариванием с той или иной рестриктазой и клонируют их обычным путем. Различные библиотеки ДНК широко используют при реализации программы «Геном человека», а также для других целей, например при поиске полиморфных ДНК-маркеров.

- Вернуться в оглавление раздела "Генетика. Медицинская генетика."