Советуем для ознакомления:

Разделы генетики:

Популярные разделы сайта:

Оглавление темы "Методы анализа структуры ДНК. Геном человека.":
1. ПЦР. Полимеразная цепная реакция.
2. Методы анализа структуры ДНК. Секвенирование ДНК. Сиквенс ДНК.
3. Геном человека. Создание генетической карты генома человека.
4. Создание физической карты генома. Котиги.
5. Сиквенс генома человека. Стратегия сиквенса генома человека. Фингерпринт клона.
6. Особенности организации генома человека. Паразитические повторы ДНК.

ПЦР. Полимеразная цепная реакция.

Кроме описанного способа клонирования последовательностей ДНК in vivo, существует также способ клонирования in vitro, который получил название полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Обязательным условием для проведения ПЦР является знание последовательности нуклеотидов, фланкирующих клонируемую последовательность.

Для проведения ПЦР необходимо предварительно синтезировать пару так называемых праймеров, которые представляют собой олигонуклеотиды, т.е. короткие последовательности нуклеотидов (примерно по 20 п.н.), комплементарных фланкирующим последовательностям размножаемого фрагмента ДНК.

ПЦР. Полимеразная цепная реакция.

После денатурации изучаемого фрагмента ДНК, т.е. его разделения на две нити при высокой температуре (94 °С), температуру снижают примерно до 55 °С, в реакционную смесь добавляют праймеры, которые комплементарно связываются с соответствующими участками этих нитей, и особую термостабильную ДНК-полимеразу, а также набор из 4 свободных нуклеотидов.

ДНК-полимераза, при ПЦР, на каждой цепи достраивает комплементарную цепь (достраивание цепей ДНК производят при промежуточной температуре, обычно при 72 °С). Затем следует денатурация вновь образованных ДНК цепей с помощью температурной обработки, к которой ДНК-полимераза не чувствительна. К вновь образованным нитям фрагмента ДНК снова присоединяются свободные праймеры, и достраивание комплементарных цепей с помощью ДНК-полимеразы происходит теперь уже на 4 нитях исследуемой ДНК. Затем снова следует денатурация вновь образованной ДНК, и цикл достраивания повторяется теперь уже на 8 нитях.

Так может повторяться до бесконечности или до исчерпания свободных нуклеотидов в реакционной смеси, но обычно 20—30 циклов хватает, чтобы получить достаточное количество ДНК изучаемого фрагмента для любых последующих манипуляций с этим фрагментом. Температурный режим в каждом цикле ПЦР сохраняют таким же, как и для первого цикла.

- Читать далее "Методы анализа структуры ДНК. Секвенирование ДНК. Сиквенс ДНК."