Процессы катионного транспорта, лежащие в основе возбуждения и сопряжения, происходят, как было показано выше, в саркоплазматическом ретикулуме миокардиальной клетки. Интенсификация этих процессов подразумевает длительную гиперфункцию самого саркоплазматического ретикулума, а следовательно, и возможность того, что в процессе гиперфункции, гипертрофии и недостаточности сердца ретикулум может гипертрофироваться, изнашиваться — страдать структурно и функционально.

Для того чтобы экспериментально проверить реальность такого рода сдвигов, нами совместно с сотрудниками А. А. Покровского А. И. Арчаковым и О. А. Любимцевой изучалась динамика активности энзимов саркоплазматического ретикулума в процессе развития гиперфункции и гипертрофии сердца.

Данные, имеющиеся в литературе (Hulsmans, 1961; Webster, Williams, 1964; Ulbrecht, Kruckenberg, 1965) и полученные ранее в лаборатории, руководимой А. А. Покровским, показали, что ацетилэстераза и бутирилхолинэстераза локализованы главным образом в саркоплазматическом ретикулуме миокардиальных клеток. Это позволяет использовать активность данных энзимов и соотношение между их общей активностью и активностью неосаждаемой фракции как критерий, характеризующий состояние саркоплазматического ретикулума.

В опытах использовали крыс-самцов весом 150—200 г. Поперечное сечение аорты уменьшали в 3 раза с помощью экспериментальной коарктации. Животных забивали через 4, 7, 20, 45 и 135 суток после создания коарктации. В качестве контроля использовали животных, у которых производили операцию на аорте без ее сужения.

Непосредственно после забоя сердца подопытных и контрольных крыс помещали в охлажденный до 0° раствор сахарозы с рН 7,4. Мышцу левого желудочка измельчали ножницами на холоду и гомогенизировали в 0,25 М сахарозе (рН 7,4) при разведении 1 : 9 (вес/объем) в гомогенизаторе Поттера с тефлоновым пестиком сначала вручную движением пестика вверх и вниз (3 минуты) и затем с помощью электромотора при 800—1000 об/мин (1 минуту). В ходе исследования выявилось большое значение стандартизации процедуры гомогенизации.

Общую активность, представляющую собой суммарную активность фермента, определяли после полного освобождения его из субклеточных структур. Ее измерение проводилось в гомогенатах, обработанных тритоном Х-100 в конечной концентрации 0,2%. Неосаждаемая активность — это активность той фракции фермента, которая при данных условиях обработки материала оказывается не связанной со структурами. Определение ее проводили в надосадочной жидкости, полученной после центрифугирования гомогената в течение 60 минут при 20 000 об/мин.

Связанная активность представляет собой активность фермента, связанного со структурами и осаждающегося при центрифугировании. Данный вид активности рассчитывали по разности между общей и неосаждаемой активностями.

Определение ферментов проводили с помощью ультрамикрометодов, разработанных в лаборатории, руководимой А. А. Покровским (А. А. Покровский, А. И. Арчаков, 1965).

Коарктация аорты привела у всех животных, использованных в данном опыте, к выраженной гипертрофии левого желудочка миокарда. Наиболее быстро рост левого желудочка происходил в течение первых 7 суток после начала гиперфункции; относительный вес желудочка нарастал постепенно и через 45—135 суток составлял 182—142% нормального.
Общая и неосаждаемая активность этого фермента у контрольных крыс повышалась с возрастом животных. Доля же неосаждаемой активности энзима в процентах от общей колебалась в пределах 41—52 и не зависела от возраста.

- Читать "Ацетилхолинэстераза при пороке сердца. Бутирилхолинэстераза при пороке сердца"