Советуем для ознакомления:

Кардиология:

Популярные разделы сайта:

Стереологический анализ кардиомиоцитов. Получение среза миокарда

Объектом электронно-микроскопического исследования служили образцы ткани папиллярных мышц левого желудочка сердца. Выбор этого объекта обусловлен тем, что папиллярные мышцы являются представительной частью сократительного миокарда. Повреждения, характерные для миокарда в целом, как правило, захватывают и их [Семенова Л. А., Целлариус Ю.Г., 1978; Непомнящих Л. М., 1981].

Кроме того, немаловажным преимуществом этого объекта является параллельное длинной оси мышцы расположение мышечных клеток, что значительно облегчает их ориентацию в образцах. Способ забора материала для электронной микроскопии описан выше. В качестве фиксатора использовали 4%-ный параформальдегид, приготовленный на буфере Миллонига с рН 7,2—7,4 [Millonig G., 1962] по прописи Б. Уикли [1975].

Параформальдегид обладает большими преимуществами по сравнению с глутаральдегидом или первичной осмиевой фиксацией, главное из которых — высокая скорость проникновения в ткани,, что важно для предотвращения аутолитических изменений в образце [Семенова Л. А., 1976; Семенова Л. А., Целларйус Ю. Г.. 1978; Непомнящих Л. М., 1981; Winborn W. В., Seelig L. L., 1970].

кардиомиоциты

Через час после начала фиксации папиллярную мышцу дополнительно нарезали на кусочки размером 1 мм3, которые погружали в свежую порцию фиксатора на 3 ч при температуре 4°С. Кусочки нарезали в форме прямоугольных параллелепипедов так, чтобы их длинная сторона совпадала с продольной осью мышечных волокон. После фиксации кусочки промывали в трех порциях 0,1 М фосфатного буфера Миллонига (рН 7,2—7,4) в течение 30 мин. Далее проводили фиксацию в 1 %-ном растворе четырехокиси осмия на 0,1 М фосфатном буфере при тех же значениях рН в течение 2 ч.

Затем кусочки быстро промывали в двух сменах буферного раствора, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации, проводили через пропиленоксид (или ацетон) и помещали в смесь эпоксидных смол на 10—15 ч для пропитывания. Использовали смесь эпона и аралдита в следующей прописи: эпон 812—25 мл, аралдит М — 15, уплотнитель DDSA (HY 964)— 55, пластификатор-дибутилфталат — 2 мл, катализатор BDMA (DY 064)— 10 капель на 10 мл смеси. После пропитки образцы ткани помещали в желатиновые капсулы, заполненные свежеприготовленной смесью эпоксидных смол. Полимеризацию проводили при 60° С в течение 1 сут.

С каждого блока, залитого в эпоксидные смолы, вначале получали полутонкие срезы (1 мкм), а затем ультратонкие. Для этой цели использовали ультратом LKB III. Полутонкие срезы окрашивали 1%-ным раствором толуидинового синего или азура II, приготовленного на 1 %-ном растворе буры [Уикли В., 1975; Непомнящих Г. И. и др., 1978].

Полутонкие срезы использовали для морфометрического и стереологического анализа тканевой организации миокарда и для более подробного светооптического исследования.
Ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца [Уикли В., 1975; Reynolds E. S., 1963] и исследовали в электронном микроскопе JEM 100 В.

- Читать далее "Ультраструктурный стереологический анализ кардиомиоцитов. Стереология кардиомиоцитов"

Оглавление темы "Гистоморфология миокарда":
1. Количественное морфологическое исследование сердца. Стереологический анализ общепатологических исследований
2. Возможности стереологии сердца. Оценка структурно-функционального состояния тканей
3. Возможности морфологических методов исследования сердца. Морфометрия и стереология в диагностической морфологии
4. Развитие стереологии в морфологии. Радиология и иммуногистохимия вместе со стереологией
5. Световая микроскопия миокарда. Методы световой микроскопии мышцы сердца
6. Морфометрия миокарда. Стереология миокарда
7. Стереологический анализ кардиомиоцитов. Получение среза миокарда
8. Ультраструктурный стереологический анализ кардиомиоцитов. Стереология кардиомиоцитов
9. Трехмерная ультраструктура сердца в норме. Стереология мышечной ткани сердца
10. Компоненты паренхимы миокарда. Строма мышечной ткани сердца