Советуем для ознакомления:

Фармакология:

Популярные разделы сайта:

Вытеснение морфином лигандов с рецепторов. Скорость взаимодействия морфина с рецепторами

Анализ кривых конкурентного вытеснения позволяет сделать еще два важных вывода. Во-первых, морфин, D-Ala2, D-Leu5-энкeфалин в концентрациях порядка 10"5 М практически полностью вытесняют меченые лиганды. Это говорит о том, что общие пулы рецепторов u- и б-лигандов совпадают. Во-вторых, результаты количественного анализа конкурентного вытеснения указывают на то, что высокоаффинные центры связывания морфина являются низко аффинными для D-Ala2, энкефалина и, наоборот, высокоаффинные центры связывания D-Ala2, энкефалина являются низко аффинными центрами связывания морфина.

При этом сравнение параметров высокоаффинных центров морфина и высокоаффинных центров D-Ala2, энкефалина с литературными (Chang et al., 1979; Kosterlitz, 1985) говорит в пользу того, что эти центры соответствуют классическим и опиоидным рецепторам.

С целью выявления возможного наличия или отсутствия кооперативных эффектов в системе опиоидных рецепторов, а также определения констант скорости взаимодействия лигандов с рецепторами была изучена кинетика ассоциации и диссоциации морфина и D-Ala-, энкефалина с мембранными препаратами головного мозга крыс. Кинетические кривые неспецифического связывания лигандов удовлетворительно описываются одним экспоненциальным членом с характеристическими временами 5 и 7 мин для 3H-D-Ala2, энкефалина и 3Н-морфина соответственно. Анализ данных по кинетике специфического связывания 3Н-морфина, 3H-D-Ala2, энкефалина в полулогарифмических координатах показывает, что процесс комплексообразования 3H-D-Ala2, энкефалина с опиоидными рецепторами описывается тремя экспоненциальными членами.

Полученные результаты вполне согласуются с данными равновесных исследований. Некоторое кажущееся противоречие наблюдается лишь в случае с морфином. Однако двухэкспоненциальный характер кинетики связывания в этом случае можно объяснить тем, что при используемых нами концентрациях меченого морфина 7 нМ вклад его взаимодействия с низкоаффинным центром не превышает 5-10% и поэтому реально не может быть выделен.

рецепторы

Результаты исследования зависимости показателей экспонент предэкспоненциальных множителей Ci от концентрации меченого лиганда для D-Ala2, энкефалина и морфина представлены на рисунке. Из рисунков видно, что: а) показатели экспонент линейно зависят от концентрации соответствующего лиганда и прямые, характеризующие разные центры связывания одного лиганда, явно не параллельны; б) предэкспоненциальные множители отрицательны и гиперболически зависят от концентрации лиганда. По некоторым данным (Boeynaems, Cauntraine, 1980; Варфоломеев, Зайцев, 1982), все перечисленные факты позволяют сделать вывод об отсутствии кооперативных взаимодействий опиоидных рецепторов при связывании 3Н-морфина или 3H-D-Ala2, энкефалина. Полученные зависимости дают также возможность оценить значения кинетических констант диссоциации и ассоциации изучаемых лигандов с отдельными типами опиоидных центров.

Сравнение констант скорости диссоциации, полученных разными методами, показывает, что они достаточно хорошо совпадают. Обращает на себя внимание близость кинетических констант диссоциации морфина для супервысокоаффинного и высокоаффинного центров. Именно по этой причине кинетика диссоциации морфина описывается одним экспоненциальным членом, а не двумя, как можно было бы ожидать, исходя из его использованной при связывании концентрации.

Важным выводом проведенной работы является удовлетворительное совпадение значений равновесных констант, полученных из кинетических исследований, со значениями констант, полученных при исследовании в условиях равновесия. Этот факт подтверждает правильность выбранной кинетической модели взаимодействия лигандов в системе опиоидных рецепторов.

Нами было изучено влияние различных концентраций предварительно добавленных в систему немеченых лигандов - морфина, D-Ala2, энкефалина и налоксона - на начальные скорости и кинетику ассоциации меченых u-лиганда морфина и s-лиганда D-Aia2, энкефалина (Зайцев, 1987а).

Поскольку меченый лиганд вводили в систему только после того, как устанавливалось равновесие немеченый лиганд - рецепторы, полученные результаты говорят в пользу выдвинутого предположения о существовании двух различных супервысокоаффинных центров связывания морфина и D-Ala2, энкефалина u и S соответственно.

- Читать далее "Влияние температуры на опиоидные рецепторы. Терморегуляция опиоидных рецепторов"

Оглавление темы "Обмен энкефалина":
1. Связывание морфина с рецепторами. Высокоаффинные опиоидные рецепторы
2. Обратимость связывания морфина. Комплексообразование морфина
3. Вытеснение морфином лигандов с рецепторов. Скорость взаимодействия морфина с рецепторами
4. Влияние температуры на опиоидные рецепторы. Терморегуляция опиоидных рецепторов
5. Типы рецепторов морфина и энкефалина. Механизмы регуляции опиоидных рецепторов
6. Влияние щелочных металлов на рецепцию энкефалина. Влияние кальция на обмен энкефалина
7. Комплексообразование энкефалина и щелочные металлы. Эффекты энкефалинов
8. Диссоциация энкефалинов и металлы. Влияние магния на обмен энкефалинов
9. Влияние pH на обмен энкефалинов. Кислотное равновесие опиоидных рецепторов
10. Комплексообразование энкефалинов с u-рецепторами. Влияние металлов на u-рецепторы