Для выяснения роли эндогенных двухвалентных катионов в процессе комплексообразования 3H-D~Ala2, энкефалина с опиоидными рецепторами мембран головного мозга крыс было исследовано влияние преинкубации препаратов со специфическими комплексонами - EGTA и EDTA. После преинкубации мембран в растворах хелаторов (10 мМ) с последующей отмывкой уровень специфического связывания 3H-D-Ala2, энкефалина снижался в 2-3 раза в равной степени для EGTA и EDTA. Представляло интерес определить, на какие параметры процесса связывания лигандов с рецептором влияет преинкубация с хелаторами. С этой целью изучены изотермы комплексообразования 3Н-D-Ala2, энкефалина с препаратом мембран, преинкубированным с 10 мМ EGTA.

Данные экспериментов обрабатывались с использованием вышеописанных подходов. Анализ полученных результатов показывает, что процесс комплексообразования 3H-D-Ala2, энкефалина с опиоидными рецепторами препаратов головного мозга крыс и в присутствии хелаторов, как и в их отсутствие, описывается моделью с тремя независимыми типами центров связывания (Varfolomeev et al., 1987; Зайцев, 1987).

Преинкубация мембранного препарата с EGTA приводит к увеличению значения К2набл. При этом в рамках предложенной модели концентрации центров связывания, a также К1набл значимо не меняются. Таким образом, для комплексообразования 3H-D-Ala2, D-Leu5-3H-кефалина с s-центром связывания существенно наличие эндогенных двухвалентных ионов. На связывание лиганда с u-центрами, а также супервысокоаффинным s-центром эндогенные двухвалентные ионы заметного влияния не оказывают.

Как следует из анализа литературы (Enna et al., 1977; Geisler et al., 1982; Vickroy et al., 1983; Kato et al., 1983; Berru et al., 1983), из всех ионов щелочноземельных и переходных металлов наиболее важными для функционирования мембранно-связанных рецепторов, и в частности опиоидных рецепторов, являются ионы Са2+, Мn2+ и Mg2+. В этой связи в первую очередь нами было изучено влияние на опиатную рецепцию именно этих катионов (Зайцев, Породенко, Варфоломеев, 1984; Породенко, Зайцев, Варфоломеев, 1984; Зайцев, Породенко, Варфоломеев, 1985; Породенко, Зайцев, Варфоломеев, 1985; Varfolomeev et al., 1987).

Результаты исследования эффектов ионов Са2+ и Мn2+ на связывание 3H-D-Ala2, энкефалина с препаратом мембран головного мозга крыс показывают наличие "активации" процесса связывания 3H-D-Ala2, энкефалина в присутствии ионов Са2+ и Мn2+. Этот процесс обратим. Действительно, отмывка мембранного препарата рецепторов от добавленных ионов путем промывания в буфере приводит к снижению эффекта ионной активации связывания 3H-D-Ala2, энкефалина. а промывка 3 мМ EDTA полностью его снимает.

- Читать далее "Комплексообразование энкефалина и щелочные металлы. Эффекты энкефалинов"