Результаты исследования влияния ионов металлов на изотермы комплексообразования 3H-D-Ala2, энкефалина с рецепторами позволяют сделать следующие выводы. Во-первых, добавление ионов Са2+ и Мn2+ в среду инкубации не оказывает влияния на комплексообразование 3HD-Ala2 энкефалина с супервысокоаффинным центром и на концентрации всех трех типов рецепторов. Во-вторых, в присутствии ионов Са2+ и Мn2+ усиливается сродство лиганда к s-рецептору. Для u-рецептора этот эффект наблюдается только в присутствии ионов Мn2+.

Характер изменения значений констант диссоциации комплексов лиганда с u и s-рецепторами при увеличении концентрации ионов Са2+ и Мn2+ в среде демонстрируют рисунки. Значения К2набл гиперболически уменьшаются в присутствии низких концентраций ионов Са2+ и Мn2+; при увеличении концентрации ионов более 10 мМ Кгнабл увеличивается. Последнее связано с эффектом ионной силы раствора. Действительно, при добавлении в присутствии 5 мМ СаС1г эквивалентного по ионной силе количества КС1, не оказывающего специфического действия на опиоидные рецепторы, наблюдается сходный эффект. Катионы Са2+ и ионная сила раствора не влияют на наблюдаемую константу диссоциации комплекса 3H-D-Ala2, энкефалина с u-рецептором (К3набл)), тогда как в присутствии ионов Мп2+ происходит гиперболическое уменьшение К3набл.

Активирующее влияние ионов металлов на сродство энкефалина к рецепторам может быть следствием их связывания с рецепторами. Описанный эффект может быть обусловлен и комплексообразованием ионов с молекулой лиганда образованием более активной его конформации. С целью про верки щи леднего предположения исследовали возможности спи сывания ионов Сa2+ и Мn2+ с молекулами D-Ala2. Энкефалина в условиях инкубации. Для этого были использованы следующие методы. Во-первых, с помощью ионоселективного (Са2+-селективного) электрода измеряли концентрацию свободных ионов Са2+ в присутствии и в отсутствие избытка D-Ala2,энкефалина. Видно, что присутствие D-Ala2, энкефалина в среде не влияет на свободную концентрацию ионов Са2+ в растворе, что говорит об отсутствии комплексообразования Са2+ с D-А1а~, 0-Ьеи5-энкефалином.

Во-вторых, с использованием метода кругового дихроизма (КЛ) была изучена возможность изменения конформации пептида в присутствии ионов металла. Из данных, видно, что добавление ионов металла в среду инкубации не приводит к сколь-нибудь заметным изменениям спектров КД D-Ala2, энкефалина. Полученные результаты хорошо согласуются с данными работ (Filippe et al., 1979; Hollosi et al., 1980), в которых не наблюдались изменения конформации аналогов энкефалина в водной среде в присутствии ионов металлов. В-третьих, отсутствие комплексообразования ионов Са2+ и Мп2+ с D-Ala2, энкефалином было показано в опытах с использованием спектрофотометрического индикатора Арсеназо-Ш.

Для этой цели измеряли поглощение комплексов ионов с индикатором на характерных длинах волн при избытке или отсутствии энкефалина. Выбор концентраций компонентов системы осуществлялся исходя из соотношения концентраций иона, оказывающего воздействие на рецепцию энкефалина, и эффективной равновесной константы нестойкости комплекса иона с индикатором таким образом, чтобы при наличии комплексообразования D-Ala2, энкефалина с ионом металла большая часть ионов была связана с пептидом. Из представленных в данных видно, что избыток D-Ala2, энкефалина в среде инкубации не ведет к изменению поглощения растворов.

- Читать далее "Диссоциация энкефалинов и металлы. Влияние магния на обмен энкефалинов"