Константы действия ионов К при значении рН 7,4 близки к "истинным", определенным при полностью депротонированном катионсвязывающем регуля-торном участке u-рецептора. Используя эти значения Kl и Кмез, а также найденное выше pKr3, с помощью уравнений можно построить теоретическую кривую, на которую, хорошо ложатся экспериментальные точки. Это означает, что влияние ионов металлов на связывание 3H-D-Ala2, энкефалина с u-рецептором с учетом состояния ионизации лиганда в диапазоне рН 6,2-8,3 описывается схемой.

Выше нами было показано, что ионы Са2+ не оказывают влияния на К3 набл при всех исследованных значениях рН. В этой связи представляет интерес изучение возможности влияния Са2+ на ионную активацию процесса комплексообразования 3H-D-Ala2, энкефалина с u-рецептором. Соответствующие экспериментальные данные позволяют сделать вьшод о том, что константы, характеризующие действие ионов Мп2+ на u-рецепторы, линейно увеличиваются с увеличением концентрации ионов Са2+, вплоть до концентраций 5 мМ.

Это свидетельствует о конкурентном характере ингибирования эффекта ионов Мn2+ ионами Са2+ и позволяет определить значение константы ингибирования: КСа3 — 2, 2 ±0,3 нМ.

Таким образом, полученные результаты позволяют сделать следующие заключения. Активация ионами металлов связывания 3H-D-Ala2, D-Leu5-энкефалина с u-рецепторами происходит при их комплексообразовании с катионсвязывающим участком рецептора, что приводит к уменьшению константы диссоциации комплекса рецептора с пептидом. При протонировании ионогенных групп катионсвязывающего участка рецептора, так же как и при связывании ионов Са2+ с ним. параметры низкоаффинной рецепции 3H-D-Ala2, D-Leu5-энкефалина не меняются, однако оба этих процесса конкурируют с процессами связывания активирующих ионов (Mg2+, Mn2+. Ni2'+, Со2+, La3+, Nd3+, Sm3+, Eu3+, Gd3+) с рецептором. Отсюда следует, что все указанные катионы связываются с одной и той же функциональной группой рецептора, при этом эффективными активаторами низкоаффинной рецепции D-Leu-энкефалина являются только ионы переходных металлов.

Взаимодействие энкефалина с бета-рецептором

Для более подробного выяснения механизма действия ионов на связывание энкефалина с рецептором исследованы рН-зависимости К2нбл при различных концентрациях ионов Са2+ - представителя группы ионов, селективно повышающих сродство высокоаффинного центра связывания к лиганду. Экспериментальные данные, иллюстрирующие влияние ионов Са2+ на рК2набл, приведены на риунке и позволяют сделать следующие выводы:

1) присутствие в среде ионов Са2+ приводит к тому, что уменьшение сродства лиганда к рецептору наступает при более высоких значениях рН;
2) ионы Са2+ не влияют на минимальное значение К2насл. Согласно расчетам, кривая 3 отражает титрование группы с рКа=7,9, т.е. в присутствии 5 мМ СаСCl2 вид рН-зависимости соответствует ионизации лиганда.

При математической обработке кривой f найдено, что взаимодействие 3H-D-AIa2, D-Leu5-9HKe-фалина с u-рецептором контролируется еще одной ионогенной группой с рК2—7,0. Поскольку по данным титрования D-Ala2, D-Leuu- энкефалина молекула его не содержит группы с таким значением рКа, она должна присутствовать в молекуле рецептора. Кроме того, полученные результаты свидетельствуют о конкуренции ионов Са2+ с протонами за эту ионогенную группу.

- Читать далее "Влияние цинка на опиоидные рецепторы. Влияние верапамила на обмен энкефалина"