Советуем для ознакомления:

Фармакология:

Популярные разделы сайта:

Фосфатные группы опиоидных рецепторов. Селективные активаторы энкефалина

Для подтверждения участия фосфатных групп в процессе регуляции рецепторов было изучено влияние модификации препарата мембран головного мозга крыс молибдатом аммония на связывание 3H-D-Ala2, энкефалина с 6-рецептором. Проведенное исследование показало, что уровень связывания 3H-D-Ala2, энкефалина с модифицированным (NH4)Mo04 рецептором (кривая 1) в 3 раза выше контрольного, связывание 3H-D-Ala2,энкефалина с u-рецептором при этом не меняется. Добавление ионов Са2+ в среду инкубации значительно увеличивает уровень связывания 3H-D-Ala2, энкефалина с высокоаффинным рецептором в контрольном препарате, но не в препарате, преинкубированном с (NH4)2Mo04.

И наконец, уровни связывания 3H~D-Ala2, энкефалина с контрольным препаратом в присутствии высоких концентраций Са2+ близки к уровню связывания лиганда с модифицированным препаратом. Таким образом, результаты по химической модификации высокоаффинных центров связывания D-Ala2, энкефалина молибдатом аммония подтверждают предположение об у 1астии остатков R-0-PО42-в связывании ионов металлов. Применение разработанного нами корреляционного подхода для выявления природы исследуемых катионсвязывающих участков u-рецепторов показывает, что близкие к единице значения коэффициентов корреляции наблюдаются в случае имидазола и гистидина. Выше было отмечено, что ионы Са2+ хотя и не активируют, как большинство остальных изученных ионов, u-рецепторы, но также взаимодействуют с их катионсвязывающими участками.

Данное предположение подтверждается результатами исследования корреляционных зависимостей. Итак, полученные результаты позволяют предположить, что катионсвязывающий участок u-рецептора содержит имидазольную группу. Этому предположению соответствует и определенное выше значение рКа катионсвязывающего участка u-рецептора (рК), равное 6,4.

На возможное участие остатка гистидина в структуре рецептора указывают результаты химической модификации мембранного препарата диэтилпирокарбонатом (ЛЭПК) (Зайцев, Породенко, Варфоломеев, 1985; Зайцев, 1987).

опиоидные рецепторы

Этот реагент при концентрациях ионов водорода, близких к нейтральным, обладает высокой селективностью к имидазольным группам гистидина.

Результаты изучения химической модификации опиоидных рецепторов ДЭПК позволяют сделать следующие выводы. Во-первых, исследование кинетики инактивации опиоидных рецепторов в процессе преинкубации препаратов мембран с ДЭПК) показывает, что модификатор ингибирует связывание 3H-D-Ala2, энкефалина с u-рецептором, практически не оказывая влияния за изученное время (до 5 мин) на комплексообразование лиганда с рецептором. Во-вторых, присутствие в процессе модификации опиатных лигандов защищает рецептор от модификации. При этом концентрации, уменьшающие инактивацию на 50%, равны 3, 7 и 200 нМ для налоксона, морфина и D-Ala2, энкефалина соответственно.

Эти значения близки константам диссоциации комплексов лигандов с рецептором. В-третьих, селективные активаторы комплексообразования D-Ala2, энкефалина с u-рецептором - ионы Ni2+ - защищают рецептор от инактивации ДЭПК. Преинкубация препаратов мембран с 1,2 мМ ДЭПК в течение 3 мин приводит к снижению уровня связывания 3H-D-Ala2, энкефалина с uрецептором на 85%. При добавлении до обработки ДЭПК 1 мМ NiCb уровень связывания 3H-D-Ala2, энкефалина составляет 91%. Как показала проверка, эффект ионов Ni2+ не связан с комплексообразованием иона Ni2+ с ДЭПК. Отсюда следует, что модифицируемая группа входит в состав катионсвязывающего участка низкоаффинного центра связывания D-Ala2, энкефалина. Эффект ДЭПК на этот центр обращается гидроксиламином.

Все это говорит о том, что наблюдаемое нами ингибирующее влияние ДЭПК на связывание D-Ala, энкефалина с u-рецептором обусловлено модификацией этим, реагентом имидазола гистидина.

Итак, низкоаффинный центр связывания 3H-D-Ala2, D-Leu5-энкефалина (высокоаффинный центр связывания морфина) содержит остаток гистидина, и свойства этого центра, в частности сродство к D-Ala, энкефалину и морфину, зависят от присутствия в среде ионов Mg2+ и переходных металлов.

- Читать далее "Радиорецепторный анализ. Техника радиорецепторного анализа"

Оглавление темы "Опиоидные рецепторы":
1. Чувствительность u-рецепторов под действием металлов. Взаимодействие энкефалина с бета-рецептором
2. Влияние цинка на опиоидные рецепторы. Влияние верапамила на обмен энкефалина
3. Влияние металлов на обмен морфина. Различия опиоидных и кальциевых каналов
4. Катионсвязывающие группы опиоидных рецепторов. Природа катионных групп рецепторов опиоидов
5. Фосфатные группы опиоидных рецепторов. Селективные активаторы энкефалина
6. Радиорецепторный анализ. Техника радиорецепторного анализа
7. Стабильность рецепторных препаратов. Количественное определение рецепторов
8. Чувствительность радиорецепторного анализа. Зависимость точности радиорецептивного анализа
9. Влияние на радиорецепторный анализ гетерогенности рецепторов. Лиофилизированные мембраны в радиорецептивном анализе
10. Натриевый сдвиг от лиофилизированных мембран. Фармакокинетика морфина и энкефалинов