Результаты изучения тушения анионами иода люминесценции ТНС, связанного с мембраной репродуктивной клетки, до и после контакта с Si02 подтвердили, что компоненты мембран испытывают конформационные перестройки под действием дисперсного кремнезема. Для изучения влияния дисперсного кремнезема на заряд поверхности репродуктивной клетки в качестве флуоресцентного зонда использовали пирен, который способен связываться с неполярными областями белков и липидного бислоя.

Установлено, что константа тушения люминесценции эксимеров пирена анионами иода уменьшается при контакте клетки с дисперсным кремнеземом. Это обусловлено, по-видимому, ростом отрицательного заряда поверхности клетки. Ниже приводится гипотетический механизм взаимодействия частиц Si02 с мембраной репродуктивной клетки.

Отрицательно заряженные микрочастицы диоксида кремния в суспензии репродуктивных клеток активно адсорбируются на тех участках мембраны (белках), которые по какой-то причине имеют пониженный отрицательный заряд (находятся ближе к своей изоэлектрической точке). Эти участки приобретают дополнительный отрицательный заряд за счет отрицательного заряда частиц Si02.
Такой привнесенный заряд может препятствовать взаимодействию между клетками и тем самым повышать их жизнеспособность.

Для изучения мембранотропных свойств коллоидного диоксида кремния использован метод лазерной проточной цитофлуориметрии. Он широко распространен в цитологии для измерения таких параметров клетки, как размер, форма, содержание ДНК, РНК, белка и т. п. Метод основан на детекции сигналов светорассеяния и флуоресценции, исходящих из клетки под воздействием лазерного луча.

В результате анализа установлено, что интактные эритроциты по сравнению с опытными характеризуются более интенсивным прямым светорассеянием. Противоположный эффект наблюдается при регистрации сигналов бокового (под углом 90 °С) светорассеяния: контрольные эритроциты рассеивают свет менее интенсивно, чем эритроциты в суспензии Si02. Установлено, что частицы кремнезема аутофлуоресцируют в зеленой области спектра более интенсивно, чем эритроциты.

На гауссовской гистограмме распределения интенсивности аутофлуоресценции оба распределения не перекрываются и широко разделены. Форма гистограммы распределения флуоресценции частиц Si02 отражает, очевидно, гетерогенность в размерах частиц (полидисперсность). После добавления эритроцитов к суспензии Si02 наблюдается смещение распределений флуоресценции по направлению друг к другу, причем появляется область их частичного перекрывания.

Наблюдаемые изменения в светорассеивающих свойствах эритроцитов под влиянием коллоидного кремнезема могут быть вызваны деформацией клеточных мембран, что подтверждают данные. Увеличение интенсивности флуоресценции эритроцитов в суспензии высокодисперсного кремнезема можно объяснить как результат адсорбции эритроцитами значительного числа мелких частиц Si02, обладающих высокой аутофлуоресценцией.

В то же время адсорбция частицами кремнезема мембран (теней эритроцитов) и содержимого лизированных клеток приводит к снижению (тушению) флуоресценции этих частиц. Флуоресцентный анализ событий с большим светорассеивающим сигналом показал, что они вызваны главным образом крупными частицами Si02, ассоциированными с мембранами до и после лизиса клеток.

- Вернуться в оглавление раздела "Фармакология"