Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Темнопольная микроскопия. Техника темнопольной микроскопии

В 1934 г М П. Архангельским было предложено использовать обычный конденсор микроскопа, вставляя в него кружок черной бумаги. Для вырезывания кружка удобно пользоваться бумагой, в которую упаковывают светочувствительные фотопластинки и фотобумагу. Кружок имеет четыре выступа, которые, упираясь в металлическую оправу линзы, обеспечивают центральное положение кружка и равномерный просвет ,щели вокруг него.

Правильный подбор величины щели, окружающей бумажный кружок, имеет существенное значение. Следует вывернуть нижнюю линзу конденсора и вырезать кружок черной бумаги по величине этой линзы, а затем, оставляя выступы, срезать с краев полоски в 2—2,5 мм шириной. Нижняя линза вместе с кружком на ней ввертывается в конденсор. При малой величине щели будет проходить недостаточно света, и все поле будет непроницаемо темным. При чрезмерно большой величине щели будет проходить много света, поле будет светлосерым и на нем нельзя отчетливо наблюдать живые микроорганизмы.

В качестве источника света можно пользоваться осветителем с электрической лампочкой в 150 ватт. Более пригодны электрические лампы с нитью накала в виде спирали, а не в виде звезды, так как сосредоточенный источник света, давая меньшее рассеивание, позволяет легче установить необходимое темное поле.

Из современных осветителей лучшими следует признать те, которые используют «точечные лампы». Особенность осветителя с точечной лампой состоит в том, что источником света является маленькая дуга Петрова, которая образуется между двумя вольфрамовыми шариками. Электрическая дуга накаливает вольфрамовый шарик добела, это создает интенсивный пучок параллельных лучей, создающих наилучшее освещение препарата.

При отсутствии осветителя можно пользоваться электрической лампочкой в 100—150 ватт с колпаком. Для концентрирования световых лучей на зеркале микроскопа следует поставить между лампочкой и зеркалом шаровую колбу емкостью в 150 мл, наполненную дистиллированной водой.
Для приготовления препарата лучше пользоваться тонкими (1,0—1,2 мм) предметными и ровными покровными стеклами (0,2 мм).

темнопольная микроскопия

Правильный подбор толщины предметного стекла имеет существенное значение для получения качества изображения в темном поле. Чистота и сохранность поверхности стекол является необходимым условием.

Дефекты поверхности стекла: матовость, царапины, незаметные для глаза и не имеющие значения при работе со светлым полем, портят темное поле. Поэтому необходимо отобрать новые, не бывшие в употреблении предметные стекла, обмыть их водой с мылом, хорошо прополоскать в проточной воде, а затем досуха вытереть марлей или чистым полотенцем, не бывшим после стирки в употреблении.

В качестве пробного испытательного материала можно пользоваться зубным налетом, небольшое количество которого размешивается в 0,5—1,0 мл физиологического раствора. На всех стеклах наносятся препараты этой жидкости, которые просматриваются в темном поле. Хорошие стекла, дающие ясную картину темного поля, отбираются для работы.
Для получения темного поля применяется только плоское зеркало микроскопа, так как пучок световых лучей, идущих в конденсор, должен быть параллельным.

Для соединения предметного стекла с конденсором применяется иммерсионное масло, которое наносят на конденсор.
Предметное стекло наклонно постепенно опускается на конденсор так, чтобы капля масла, центр препарата и центр конденсора совпали. Это делается для того, чтобы избежать попадания мелких пузырьков воздуха между конденсором и предметным стеклом, что нарушает видимость темного поля. Предметное стекло закрепляется клеммой.

Объектив опускается возможно ниже, почти до самого покровного стеклышка. Затем, глядя в окуляр, начинают поворачивать зеркало до появления хотя бы самого незначительного просветления. После этого начинают приподнимать тубус, пока не появятся более четко видимые световые точки и пятна. Затем опять приступают к регулировке освещения зеркалом до тех пор, пока картина темного поля окончательно прояснится и станут отчетливо видны яркоосвещенные различные объекты, находящиеся в исследуемом препарате.

Пользуются объективом сухой системы х40. Если необходимо рассмотреть микроб или частицу в более увеличенном виде, то можно заменить окуляр 10 окуляром 15.
После каждого исследования необходимо сейчас же вынуть и обтереть конденсор, иначе масло просочится внутрь и загрязнит линзы.

- Читать далее "Фазово-контрастная микроскопия. Техника фазово-контрастной микроскопии"

Оглавление темы "Микроскопия и подготовка препаратов к микроскопии":
1. Микроскопическое исследование. Подготовка материала для микроскопического исследования
2. Темнопольная микроскопия. Техника темнопольной микроскопии
3. Фазово-контрастная микроскопия. Техника фазово-контрастной микроскопии
4. Подготовка материала для электронной микроскопии. Подготовка материала к окраске
5. Методы окраски препаратов. Окраска по методу Синева и метиленовым синим
6. Окраска кислотоустойчивых микробов. Окраска микробов по Граму
7. Окраска по Романовскому-Гимза. Окраска спор
8. Приготовление питательных сред. Требования к питательным средам
9. Взятие малых количеств крови. Как брать кровь из пальца для исследований?
10. Приготовление мазков крови. Взятие крови для определения СОЭ