Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Определение липазы панкреатического сока. Определение трипсина панкреатического сока

В две широкодонные колбы, емкостью по 150—200 мл, вливают по 1 мл испытуемого дуоденального содержимого и по 5 мл оливкового масла. Содержимое колб энергично взбалтывают; получается однородная жидкость. В одну колбу добавляют 10 мл спирта ректификата, 1—2 капли 1% спиртового раствора фенолфталеина, сразу же сильно встряхивая жидкость, титруют 0,1 н. раствором едкого натра до окрашивания ее в светло-розовый цвет.
Этим титрованием определяют количество свободных жирных кислот в оливковом масле, взятом для реакции.

Вторую колбу ставят в термостат на 7 часов при температуре 37°, затем, вынув ее, добавляют 10 мл 95° спирта, 1—2 капли 1% раствора фенолфталеина и, хорошо размешав жидкость, титруют ее, как указано выше.

Разность, полученная при вычитании числа, полученного при титровании первой порции, из числа, полученного при втором титровании, указывает количество 0,1 н. раствора едкого натра в миллилитрах, потраченное на титрование жирных кислот, освобожденных действием липазы. В норме это число равно от 30 мл до 80 мл 0,1 н. раствора едкого натра.

Определение трипсина панкреатического сока

Необходимые реактивы:
1. Раствор казеина. Колбу с 100 мл дистиллированной воды, 0,1 г казеина и 0,1 г углекислого натра слегка нагревают. Полученный раствор надо держать на холоде. Он годится к употреблению в продолжение не более 2 суток.
2. Раствор уксусной кислоты. В колбу вливают 5 мл ледяной уксусной кислоты, 45 мл 96° спирта, 50 мл дистиллированной воды, хорошо взбалтывают.
3. Раствор углекислого натра. В колбе с 100 мл дистиллированной воды растворяют 0,1 г углекислого натра.

панкреатический сок

Методика реакции. В девять пробирок из десяти, помещенных в штативе, наливают по 1 мл раствора углекислого натра (реактив 3).
В первые две пробирки, помимо этого, добавляют еще по 1 мл исследуемого дуоденального содержимого. Жидкость 2-й пробирки пипеткой, вдуванием и выдуванием хорошо смешивают, набирают 1 мл и переносят в 3-ю пробирку. Точно так же смешивают жидкость 3-й пробирки, насасывают 1 мл содержимого 3-й пробирки и переносят в 4-ю пробирку. Из 4-й пробирки в 5-ю пробирку и так до 9-й включительно.

Жидкость 9-й пробирки хорошо смешивают и 1 мл жидкости выливают.
Во всех пробирках получилось по 1 мл жидкости. В первой пробирке имеется 1 мл испытуемого дуоденального содержимого, начиная с 2-й пробирки дуоденальное содержимое разводится, соответственно в 2, 4, 8, 16 и т. д. до 9-й, в которой дуоденальное содержимое разведено в 256 раз. Десятая пробирка, в которой испытуемой жидкости нет, служит контролем.

Во все десять пробирок наливают по 2 мл раствора казеина (реактив 1), хорошо смешивают и ставят на 2 часа в термостат при температуре 37°. После этого пробирки вынимают из термостата и в каждую из них, начиная с последней, контрольной, наливают по 8—10 капель раствора уксусной кислоты (реактив 2).

При правильном выполнении этой методики в контрольной пробирке, в которой нет дуоденального содержимого, а следовательно, нет и трипсина, от прибавления уксусной кислоты образуется муть либо хлопья непереваренного казеина. В остальных пробирках опыта отсутствие мути указывает на наличие фермента трипсина (переваривание казеина).

Количество имеющегося трипсина устанавливают по количеству разведения испытуемой жидкости. Например: в первых 5 пробирках жидкость прозрачная, хлопья в них не образовались, следовательно, казеин переварен, а в последующих пробирках уже жидкость мутная. Следовательно, фермент имеется в первых пяти пробирках, причем в пятой пробирке испытуемая жидкость разведена в 16 раз.

Испытуемая жидкость, разведенная в 16 раз или, что все равно 1/16 неразведенной жидкости, переварила 2 мл казеина. Чтобы переварить 1 мл казеина, потребовалось бы жидкости в 2 раза меньше — 1/32 мл. Следовательно, 1 мл испытуемой жидкости может переварить не 1 мл казеина, а в 32 раза больше, т. е. 32 мл казеина, или, как принято называть, 32 трипсиновых единицы.

- Читать далее "Определение диастазы панкреатического сока. Методика определения амилазы"

Оглавление темы "Исследование содержимого желудка и двенадцатиперстной кишки":
1. Дефицит соляной кислоты. Реакция с хлорным железом Боаса
2. Определение крови в желудочном содержимом. Определение пепсина
3. Микроскопия желудочного содержимого. Состав желудочного содержимого
4. Исследование промывных вод желудка. Получение промывных вод
5. Взятие дуоденального содержимого. Техника получения содержимого двенадцатиперстной кишки
6. Определение желчных кислот. Определение билирубина и уробилина
7. Определение холестерина желчи. Методика определения холестерина
8. Определение липазы панкреатического сока. Определение трипсина панкреатического сока
9. Определение диастазы панкреатического сока. Методика определения амилазы
10. Микроскопия дуоденального содержимого. Лямблии в двенадцатиперстной кишке