Лабораторная диагностика

Сущность окраски кислотоустойчивых микробов заключается в их способности окрашиваться при нагревании сильно красящими растворами красок и не обесцвечиваться от последующего воздействия ла них слабых кислот. Этот способ помогает отличить кислотоустойчивые бактерии от других.
Полагают, что гидрооксикислота (миколовая кислота), имеющаяся в кислотоустойчивых бактериях (микобактериях) обусловливает кислотоупорность этих бактерий.

Для окраски препарата по Циль-Нильсену следует придерживаться такой последовательности:
1. На предметное стекло с высушенным и зафиксированным на пламени спиртовой горелки исследуемым материалом кладут кусочек фильтровальной бумаги (чуть поменьше предметного стекла), наливают на нее карболовый фуксин Циля. Пинцетом берут стекло, покрытое бумажкой с краской, и нагревают на пламени до появления над бумажкой паров и оставляют до полного остывания.
2. Остывшую бумажку сбрасывают и препарат промывают водой.
3. Препарат опускают в сосуд с 5% серной кислотой для обесцвечивания на 10—30 секунд.
4. Промывают водой.
5. На препарат наливают метиленовую синьку Леффлера на 3—5 минут.
6. Промывают водой и высушивают. Кислотоустойчивые микробы при этом методе окрашиваются в рубиново-красный цвет, Остальные элементы принимают синюю окраску.

Окраска микробов по Граму.

По способности микробов воспринимать или не воспринимать окраску по Граму их различают как: а) грамположительные и б) грамотрицательные.
Сущность окраски по способу Грама состоит в том, что микробы окрашиваются при слабощелочной реакции основной краской (кристаллвиолетом), после чего протравляются йодом в растворе йодистого калия или пикриновой кислотой. Затем из грамотрицательных форм краска удаляется промыванием окрашенного препарата водой и спиртом ректификатом или ацетоном.

Грамположительные микробы, благодаря имеющейся в них магниевой соли рибонуклеиновой кислоты, химически соединяются с краской, сохраняют фиолетовую окраску и не поддаются обесцвечиванию. Разница в окраске еще более усиливается контрастным дополнительным окрашиванием другой краской, цвет которой отличается от первоначальной, например, разведенным фуксином.

Грамотрицательные микробы хорошо воспринимают добавочную окраску, которая совершенно вытесняет имеющиеся остатки первоначальной, и микробы становятся розовыми.
Для правильного окрашивания по Граму большое значение имеет сохранение целостности клетки. При неправильно приготовленном препарате (например, при раздавливании между двумя стеклами), где стенки клетки могут быть повреждены, грамположительные формы могут стать грамотрицательными.

Для окраски по способу Грама употребляются следующие растворы:
1. Карболовый генциан-виолет либо кристалл-виолет.
2. Раствор Люголя (йод кристаллический — 1 г, йодистый калий — 2 г, дистиллированная вода — 300 мл. йод и йодистый калий смешивают и растворяют в 5 мл воды, после чего добавляют остальную воду). Сохраняется в темной бутылке, в темном месте.
3. Спирт 95°.
4. Разведенный фуксин (Пфейффера).

На высушенный и фиксированный на пламени мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги, размер которого равен или чуть меньше предметного стекла. На эту бумажку наливают раствор кристалл-виолета или генциан-виолета на 1—2 минуты. После этого бумажку с краской сбрасывают со стекла и, не промывая водой, на препарат наливают раствор Люголя — до почернения препарата (1—2 минуты), затем сливают раствор Люголя и, взяв в руки препарат, наливают на него 95° спирт на 0,5 — 1 минуту, слегка покачивая, обесцвечивают до тех пор, пока препарат не приобретает сероватый цвет. Сливают спирт, промывают препарат водой и окрашивают дополнительно разведенным фуксином или 1% водным раствором нейтральрот, либо 1 % водным раствором эозина на 0,5 — 1 минуту, сливают краску, промывают водой, высушивают на воздухе. Препарат исследуют в микроскоп при масляной иммерсионной системе.

Упрощенный метод окраски по Граму, предложенный А. Синевым.
1. Исследуемый мазок, фиксированный на пламени, покрывают полоской фильтровальной бумажки, пропитанной 1 % спиртовым раствором кристалл-виолета.
2. Наносят на бумажку 3—4 капли воды на 2 минуты.
3. Снимают бумажку и наливают на препарат раствор Люголя на 1—2 минуты.
4. Сливают со стекла раствор Люголя и обесцвечивают 95° спиртом (20—30 сек.).
5. Дополнительно окрашивают разведенным фуксином, промывают водой и просушивают.

- Читать далее "Окраска по Романовскому-Гимза. Окраска спор"