Приготовленный препарат фиксируют в химически чистом метиловом спирте или в смеси Никифорова 3—5 минут, вынимают, просушивают на воздухе. На высушенный препарат наливают на 20—30 минут краску Романовского-Гимза, разведенную из расчета 1,5—2 капли на 1 мл (3 капли на 2 мл) дистиллированной воды, затем препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

С целью экономии спирта и эфира, которые расходуются при фиксировании смесью Никифорова, можно пользоваться следующим составом для фиксирования препаратов, дающим хорошие результаты

В колбу всыпают 5 г сернокислого цинка и 5 г химически чистого хлористого натрия, затем наливают 100 мл дистиллированной воды Раствор хорошо смешивают и фильтруют. Препараты кладут в профильтрованный раствор на 1—2 минуты, затем, не высушивая, покрывают краской Романовского-Гимза на 30—40 минут.

Продажную краску Романовского-Гимза можно легко приготовить Для этого в две бутылки с плотными пробками наливают по одному литру свежепрокипяченной дистиллированной воды, в одну из них всыпают 1 г азура, в другую — 1 г эозина Оба эти раствора сохраняются отдельно и не портятся от времени.

Для окрашивания препарата наливают в чистый цилиндр дистиллированной воды из расчета по 2—3 мл на каждый препарат, добавляют приготовленного раствора эозина по 4 капли на каждый миллилитр воды и столько же раствора азура, хорошо размешивают и полученный раствор наливают на препарат и оставляют на 30—35 минут Этот раствор красок быстро теряет свои свойства, поэтому его надо готовить по мере необходимости.

Вода для приготовления раствора должна быть нейтральной либо слабощелочной реакции Хорошо приготовленный раствор в тонком слое (налитый на предметное стекло) должен быть синего цвета с фиолетовым оттенком

При приготовлении раствора приходится приспосабливаться иногда надо брать больше эозина и меньше азура и наоборот Контролировать качество раствора можно с помощью микроскопа
Протоплазма окрашивается в голубой, ядра клетки, слизь и капсулы — в красно фиолетовый цвет.

Окраска спор

Вследствие непроницаемости оболочки споры не воспринимают окрашивания. Однако при воздействии соляной кислоты оболочка теряет устойчивость, и поэтому краска проникает в споры.

Окраска по способу Ожешко. Приготовленный на краю предметного стекла препарат просушивают и, не фиксируя, погружают для протравы на 2—3 минуты в чашку с 1 % кипящей соляной кислотой. После этого мазок промывают водой, обсушивают, фиксируют на пламени и красят карболовым фуксином через фильтровальную бумажку с подогреванием.

Остывший освобожденный от бумажки препарат обесцвечивают 5% серной кислотой, смывают водой и докрашивают дополнительной метиленовой синькой в течение 3—5 минут, затем смывают водой и высушивают.
Споры принимают ярко-красный цвет фуксина. Вегетативное тело бактерии, обесцвеченной серной кислотой, окрашивается дополнительной краской в синий цвет.

Окраска по способу Пешкова. М. А. Пешков предложил окрашивать споры синькой Леффлера, причем для изменения устойчивости оболочки он применяет кипячение. Окрашивание спор по этому способу производится так:
1. Приготовленный мазок фиксируют на пламени.
2. На фиксированный мазок наливают метиленовую синьку Леффлера и кипятят на пламени спиртовой горелки 15—20 секунд.
3. Остывший препарат смывают водой и докрашивают 0,5% водным раствором нейтралрот в течение 30 секунд.
4. Опять смывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.

Споры окрашиваются в голубой либо в синий цвет. Протоплазма вегетативного тела бактерии — розовая.
Окраска капсул. Каплю воды, опущенную на предметное стекло, смешивают с каплей черной туши и в полученную жидкость вносят петлей немного агаровой либо бульонной культуры. Ребром шлифованного стекла размазывают жидкость вдоль стекла и фиксируют на пламени или в концентрированном растворе сулемы 1 минуту. Промывают водой, окрашивают карболфуксином или метиленовой синькой 5—10 минут, затем смывают водой, высушивают на воздухе и препарат исследуют в микроскоп. Вокруг окрашенного тела бактерий выделяются резко очерченные тушью капсулы.

- Читать далее "Приготовление питательных сред. Требования к питательным средам"