Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Осаждение белков крови. Методы осаждения белков крови

При определении составных частей крови необходимо получение безбелкового фильтрата.
Приготовление безбелковрго фильтрата.
Осаждение трихлоруксусной кислотой. Применяют 5—10% раствор трихлоруксусной кислоты. (Кристаллы для раствора следует брать стеклянной ложечкой).

В колбу вливают 1 объем раствора трихлоруксусной кислоты и добавляют, медленно при помешивании, равную часть крови, оставляют на 10 минут, затем фильтруют либо центрифугируют.
Трихлоруксусный фильтрат крови или сыворотки обладает резко кислой реакцией.

При необходимости трихлоруксусную кислоту удаляют из фильтрата кипячением.
Осаждение вольфрамовокислым натрием. Необходимые реактивы:
1. Раствор, состоящий из 6 г вольфрамовокислого натрия и 15 г безводного сернокислого натрия в 1 л дистиллированной воды.
2. 1/3 н. раствор серной кислоты.

осаждение белков крови

В эрленмееровскую колбу вливают 8 объемов реактива 1 и один объем крови, оставляют на 5 минут, после чего прибавляют, слегка взбалтывая, 1 объем реактива 2, смесь встряхивают еще минуту и фильтруют через двойной складчатый фильтр.
Фильтрование должно продолжаться не больше 25 минут.

Фильтрование можно заменить центрифугированием.
Для получения большого количества фильтрата к одному объему крови прибавляют, все время размешивая, 9 объемов смеси, (8 объемов 1/12 н. раствора серной кислоты и 1 объем 10% раствора вольфрамовокислого натрия), хорошо смешивают и фильтруют.

При осаждении белков из плазмы или сыворотки крови применяют в два раза меньше реактивов и без пятиминутного перерыва между прибавлением первого и второго реактивов.

Осаждение белков крови фосфорномолибденовой кислотой. Реактивы: в колбу с 75 ял дистиллированной воды всыпают 5 г безводного натрия, 5 г фосфорномолибденового натрия и 5—8 капель 33% раствора едкого натрия, после чего кипятят 20 минут. Прокипяченный раствор вливают в мерную колбу на 1 л, приливают 15 мл концентрированной серной кислоты и 0,25 г глюкозы и доливают дистиллированной водой до метки.

При осаждении белков этот реактив применяют в количестве в 10 раз большем, чем осаждаемая кровь. Капля приготов ленного одним из указанных способов фильтрата, смешанная на часовом стекле с каплей 20% раствора сульфосалициловой кислоты, не дающая помутнения, указывает на безбелковый фильтрат.
При различных патологических состояниях, как правило, отмечаются изменения количественного взаимоотношения между фракциями белков крови.
Для определения этих изменений существует несколько приборов. Весьма удобным для работы является нефелометр.

Определение нефелометром основано на измерении феномена Тиндаля.
При освещении сбоку сходящимися лучами растворов со взвесями частиц нерастворенного вещества образуется светящийся конус (феномен Тиндаля). Если смотреть сверху на эти освещенные сбоку растворы, то часть света, рассеиваемого частицами, попадает в глаз исследователя. Чем больше света падает на одно и то же количество частиц, тем больше света попадает в глаза исследователя.

При одинаковом количестве света интенсивность светорассеяния для раствора одного и того же вещества зависит только от числа частиц в единице объема, т. е. от весовой концентрации вещества. Чем больше частиц будет освещено одним и тем же источником света, тем больше света попадет в глаза исследователя.

Из двух мутных растворов, налитых в стаканчики, освещенных сбоку и на которые смотрят сверху, тот раствор покажется светлее, который содержит большее количество частиц.
Изменяя высоту освещенной части жидкости и все время наблюдая сверху, достигают того, что оба раствора кажутся одинаково освещенными.

В нефелометре высоты освещенной части жидкости определяются изменением ширины щелей, которые пропускают пучки света на стаканчики с растворами. Ширина щелей определяется для каждой щели по соединенной с ней шкале с делениями.

- Читать далее "Рефрактометрия для определения белков крови. Погружной рефрактометр Пульфриха"

Оглавление темы "Методы исследования крови":
1. Предохранение крови от свертывания. Реакция оседания эритроцитов
2. Определение осмотической резистентности эритроцитов. Определение времени кровотечения
3. Определение времени свертывания крови. Определение ПТИ
4. Определение времени рекальцинации. Определение устойчивости плазмы к гепарину
5. Осаждение белков крови. Методы осаждения белков крови
6. Рефрактометрия для определения белков крови. Погружной рефрактометр Пульфриха
7. Определение небелковых тел крови. Определение альбуминов и глобулинов
8. Определение белковых фракций. Техника определения белковых фракций
9. Расчет белковых фракций. Реактивы для определения сахара крови
10. Техника определения сахара крови. Лабораторный метод определения глюкозы крови