Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Рефрактометрия для определения белков крови. Погружной рефрактометр Пульфриха

Простым способом для определения белков сыворотки является рефрактометрический (преломляющий), основанный на свойстве сред различно преломлять проходящие через них лучи света.
При прохождении из одной среды в другую направление луча света меняется — преломляется.

Отношение синуса угла падения к синусу угла преломления называется показателем преломления, или рефракцией.
В зависимости от температуры, внешней среды, количества, величины и физического состояния растворенных частиц раствора меняется величина рефракции.
Для определения показателя (коэффициента) преломления имеются приборы-рефрактометры.

Погружной рефрактометр Пульфриха состоит из зрительной трубы с окуляром и объективом и двумя призмами в конце. Имеется шкала с делениями для определения границы между освещенной и темной частью поля зрения и компенсатор, при вращении которого устанавливают резкую границу между освещенной и темной частью поля зрения.

Для определения рефракции применяется баня со стеклом в стенке. В баню наливают воду, разбавляя по мере надобности теплой или холодной водой до требуемой температуры. Прибор снабжен точным термометром для поддержания постоянной определенной температуры (17,5°) воды в бане. Для направления луча света в приборе имеется специальное зеркало.

белки крови

При определении больших количеств вещества исследуемую жидкость вливают в специальный стаканчик, ставят его в штатив бани и опускают в стаканчик сухую призму прибора. При рефрактометрии малых количеств рефрактометр опускают горизонтально, наносят каплю исследуемой жидкости на основную призму, прикрывают ее осторожно дополнительной призмой, прикрепляющейся специальной для этой цели держалкой. Нижнюю часть прибора с держалкой опускают в баню с водой, зеркало устанавливают так, чтобы оно отражало свет и призму.
Через 15—20 минут, когда температура испытуемой жидкости и бани становится одинаковой (17,5°), производят отсчет.

Для этого с помощью компенсатора устанавливают резкую границу между освещенной и темной частью поля зрения, затем микрометрическим винтом передвигают шкалу до совпадения одного из ее делений с линией раздела границы. Отсчитывают целые деления по шкале и десятые доли на микрометрическом винте.
Полученные данные перечисляют по таблице.

Первый вертикальный столбец указывает величины показателя отсчета шкалы, второй — количество белков в процентах для сыворотки крови, третий столбец содержит промежуточные значения для учета десятых долей деления при определении процентного содержания белков, четвертый и пятый — отсчеты по шкале и количество белков в процентах для эксудатов и транссудатов.

Пример. При определении белков сыворотки линия раздела совпала с 47-м делением по шкале и 5-м делением на микрометрическом винте; отсчет равен 47,5. По таблице 47 деление соответствует 5,47%. Одно деление в данном случае равно разности между 47-м и 48-м делениями, т. е. 5,68—5,47=0,21%. При разности 0,21% 0,5 деления соответствует 0,11%.
Таким образом, при вычислении по данной таблице 47,5 деления соответствует количеству белков в процентах: 5,47+0,11=5,58%.

Для определения отдельных фракций белка (альбуминов, глобулинов и небелковых тел) нужен комплект других призм: основной и дополнительный. Этими призмами определяют показатель преломления (n-D) растворов с малым углом и с большим углом преломления.

Пересчет делений шкалы на показатель преломления производят по таблице. С призмой № 1 определяют n-D растворов от 1,325 до 1,367. С помощью призмы № 2 определяют жидкости с показателем преломления в пределах 1,366—1,396.

Необходимые реактивы: 1) 0,04 н. уксусная кислота (4 мл ледяной уксусной кислоты разводят водой до 1,750 мл сохраняют в хорошо закупоренной посуде); 2) насыщенный раствор сернокислого аммония (растворяют химически чистую соль (NH4)2S04 с избытком в горячей воде, фильтруют в горячем виде через бумажный фильтр и ставят в баню с температурой 17,5° на 15—20 минут).

Растворы должны быть слабощелочными; для этого к ним добавляют несколько капель аммиака. Необходимо проверять при каждом определении рефракционный показатель применяемых при опыте разведений этих растворов.

- Читать далее "Определение небелковых тел крови. Определение альбуминов и глобулинов"

Оглавление темы "Методы исследования крови":
1. Предохранение крови от свертывания. Реакция оседания эритроцитов
2. Определение осмотической резистентности эритроцитов. Определение времени кровотечения
3. Определение времени свертывания крови. Определение ПТИ
4. Определение времени рекальцинации. Определение устойчивости плазмы к гепарину
5. Осаждение белков крови. Методы осаждения белков крови
6. Рефрактометрия для определения белков крови. Погружной рефрактометр Пульфриха
7. Определение небелковых тел крови. Определение альбуминов и глобулинов
8. Определение белковых фракций. Техника определения белковых фракций
9. Расчет белковых фракций. Реактивы для определения сахара крови
10. Техника определения сахара крови. Лабораторный метод определения глюкозы крови