Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Определение небелковых тел крови. Определение альбуминов и глобулинов

В центрифужную пробирку вливают 1 мл сыворотки и 1 мл 0,04 н уксусной кислоты (реактив 1), смесь хорошо взбалтывают, пробирку плотно закрывают пробкой и ставят в холодную водян\ю баню с ватой на дне.

Баню медленно нагревают до кипения и кипятят 2—5 минут. Уровень воды в бане должен быть немного выше уровня жидкости, находящейся в бане пробирки. Когда белок выпадет, пробирку охлаждают, сгусток белка отделяют стеклянной палочкой от стенок пробирки, закупоривают ее пробкой и центрифугируют. Полученную прозрачную жидкость, состоящую из небелковых тел сыворотки и 0,02 н уксусной кислоты, рефрактометрируют призмой № 1. Небелковые тела вычисляют по формуле:

Показатель преломления — n-D небелковых тел равен n-D лишенной белков сыворотки минус nD 0,02 н. уксусной кислоты X 2. Коэффициент преломления небелковых тел сыворотки в среднем составляет 0,00160. Чтобы высчитать процентное содержание небелковых тел, надо полученное по формуле число разделить на 0,00160.

Определение альбуминов

В центрифужную пробирку вливают 1 мл насыщенного раствора сернокислого аммония для осаждения глобулинов. Набирая раствор, надо следить, чтобы в пипетку не попали кристаллы реактива; имеющиеся снаружи пипетки капли реактива надо удалить. Этой же промытой и высушенной пипеткой добавляют в пробирку такое же количество (1 мл) сыворотки. Пробирку закупоривают пробкой, энергично встряхивают и в закупоренном виде центрифугируют в продолжение часа. Полученный прозрачный центрифугат рефрактометрируют призмой № 2. Расчет по формуле: nD альбуминов = nD полученной жидкости минус nD полунасыщенного раствора сернокислого аммония Х2, минус nD небелковых тел.

определение тел крови

Коэффициент преломления 1% раствора альбумина составляет 0,00177. Чтобы определить процентное содержание альбумина сыворотки, надо разделить полученное по формуле число на 0,00177.

Определение глобулинов

Показатель преломления (nD) глобулинов равняется nD сыворотки минус nD альбуминов минус nD небелковых тел минус nD дистиллированной воды.
nD 1 % раствора глобулина = 0,00229.

Количество глобулина в процентах равно полученной по формуле величине, разделенной на 0,00229.
Для получения наиболее точных результатов опыта необходимо соблюдать тщательность в работе.

Рефрактометр марки РЛУ завода контрольно-измерительных приборов (Киев). Этот прибор состоит из двух стеклянных прямоугольных призм, находящихся в металлической оправе-камере, зрительной трубы, неподвижно соединенной со шкалой показателей преломления, и стрйки. Камера со зрительной трубой вращается с помощью рычага вокруг оси, и посредством особого приспособления циркулирующая вода сохраняет постоянную температуру призм. Вмонтированный термометр показывает температуру камеры.

Определение. После установки нулевой точки поднимают верхнюю половину камеры, вытирают обе призмы фильтровальной бумагой и мягкой неворсистой материей, после чего наносят на призму 1—2 капли сыворотки крови и быстро закрывают камеру. В окно камеры направляют свет зеркалом, камеру поворачивают так, чтобы граница светотени достигла пересечения двух линий, вращением винта устраняют окрашенность поля, получают резкую границу светотени и устанавливают ее на точке пересечения двух линий. Отсчет коэффициента преломления раствора по шкале производят посредством лупы. По величине коэффициента преломления находят процентное содержание белка по таблице.

- Читать далее "Определение белковых фракций. Техника определения белковых фракций"

Оглавление темы "Методы исследования крови":
1. Предохранение крови от свертывания. Реакция оседания эритроцитов
2. Определение осмотической резистентности эритроцитов. Определение времени кровотечения
3. Определение времени свертывания крови. Определение ПТИ
4. Определение времени рекальцинации. Определение устойчивости плазмы к гепарину
5. Осаждение белков крови. Методы осаждения белков крови
6. Рефрактометрия для определения белков крови. Погружной рефрактометр Пульфриха
7. Определение небелковых тел крови. Определение альбуминов и глобулинов
8. Определение белковых фракций. Техника определения белковых фракций
9. Расчет белковых фракций. Реактивы для определения сахара крови
10. Техника определения сахара крови. Лабораторный метод определения глюкозы крови