Лабораторная диагностика

После окраски на электрофореграмме получаются пятна, соответствующие альбумину, а-, (3- и т -глобулинам.
а -глобулины часто разделяются на аа и - а2-глобулины.
Все эти белки, заряженные в данном случае отрицательно, движутся от катода в аноду. Быстрее движутся альбумины, затем а-глобулины, глобулины, глобулины.

На ленте электрофореграммы размечают карандашом полоски в 0,5 см. Сверху над каждой полоской, начиная от альбуминов, ставят порядковые номера.
Фракции делят визуально, после чего записывают номера полосок каждой из полученных фракций.

Разрезают электрофореграмму на размеченные полоски и помещают каждую из них в отдельную пробирку с меткой. После элюирования окрашенных полосок 5 мл 0,02 н. щелочью в течение 30—40 минут элюат исследуют на электрофотоколориметре при зеленом светофильтре.

Складывая величины экстинций полосок каждой фракции и полученные числа всей электрофореграммы, вычисляют процентные соотношения отдельных белковых фракций. Если известно общее количество белка сыворотки крови, можно вычислить содержание каждой фракции в грамм-процентах.
При электрофорезе очень существенное значение имеет качество применяемой бумаги.
Лучшей бумагой для хроматографии является 154 «М» Ленинградской бумажной фабрики им. Володарского.

Реактивы для определения сахара крови

Этот метод основан на свойстве сахара восстанавливать в щелочной среде красную кровяную соль в желтую. Избыток невосстановленной соли определяют йодометрически. Количество сахара в крови определяют по количеству восстановленной кровяной соли.

Необходимые реактивы:
1) 0,45% водный раствор сернокислого цинка. 45 г сернокислого цинка растворяют в дистиллированной воде и добавляют воды до объема в 100 мл. 1 мл полученного 45% раствора сернокислого цинка разводят в 100 мл дистиллированной воды. Получается нужный для реакций 0,45% раствор сернокислого цинка, годность которого определяется в 7—8 дней;
2) 0,1 н. раствор едкого натра;
3) раствор красной кровяной соли—К3Fе (CN)6.

Для изготовления раствора 1,65 г железосинеродистого калия и 10,6 г безводного двууглекислого натрия (NaC03) растворяют в дистиллированной воде, доводят до объема в 1 л. Этот раствор надо сохранять в темной посуде на холоде. Титр этого раствора стоек в продолжение 2 месяцев;
4) раствор сернокислого цинка и, хлористого натрия: 10 г сернокислого цинка и 50 г хлористого натрия растворяют в дистиллированной воде и добавляют воды до объема 160 мл;

5) раствор йодистого калия: 12,5 г йодистого калия растворяют в дистиллированной воде и добавляют воды до объема в 100 мл. Этот раствор сохраняют в темной посуде. Для реакции смешивают 40 частей раствора № 4 и 10 частей раствора № 5. Эта смесь сохраняется в течение 6—7 дней в темной посуде;
6) 3% раствор уксусной кислоты. Для этого 3 мл ледяной уксусной кислоты вливают в колбу емкостью в 100 мл и доливают до метки 100 дистиллированной водой;

7) 1% раствор крахмала; 1 г растворимого крахмала растворяют, слегка подогревая, в 5 мл дистиллированной воды, добавляют до объема в 100 мл насыщенный раствор хлористого натрия, приготовленный заранее. Этот раствор окрашивается йодом в синий цвет;
8) 0,005 н. раствор гипосульфита — готовят перед употреблением из 0,1 н. раствора при соответствующем разведении (5 мл 0,1 н. раствора вливают в колбу и добавляют до 100 мл Дистиллированной воды, прокипяченной);
9) 0,005 н. раствор йодноватистого калия: 0,3566 г йодноватистого калия (KJ03) растворяют в двух литрах дистиллированной воды. Эхим раствором устанавливают титр гипосульфитат. Вливают в стаканчик 2 мл 0,005 н. раствора йодноватокислого калия, 2 мл смеси растворов № 4 и № 5, 2 мл раствора уксусной кислоты (№ 6) и две капли раствора крахмала (№ 7) и титруют раствором гипосульфита (№ 8) до исчезновения синего цвета.

Титр гипосульфита следует проверять при определении сахара. При расчете вносится соответствующая поправка.
Предположим, что при титровании 1 мл раствора йодноватокислого калия понадобилось 1,06 мл гипосульфита вместо 1 мл, значит раствор гипосульфита оказался слабее. Для того, чтобы получить правильное количество употребленного при титровании раствора гипосульфита, соответствующее количеству 0,005 н. раствора, надо количество израсходованного при титровании гипосульфита помножить на 1/1,06 = 0,94.

Это число будет коэффициентом поправки.
Пример: При определении сахара в крови на титрование понадобилось 0,7 мл гипосульфита. Чтоб получить число, соответствующее количеству миллилитров точного 0,005 н. раствора гипосульфита, надо 0.7 умножить на 0,94 (коэффициент поправки).
0,7X0,94=0,66

Необходимые принадлежности при постановке исследования:
1) микропипетка емкостью в 0,1 мл; 2) пробирки 15 мм в диаметре, по две на каждое исследование (два параллельных определения); 3) пробирки диаметром в 3—4 см, длиной в 10 см (двойное количество); 4) стеклянные воронки диаметром в 4 см (двойное количество); 5) пипетка Мора, емкостью в 5 мл, в 2 мл и 1 мл (по одной); 6) две градуированные пипетки по 10 мл; 7) колбы мерные в 50 мл, 100 мл; 8) микробюретка емкостью 1 мл с делениями на 0,01 мл.

- Читать далее "Техника определения сахара крови. Лабораторный метод определения глюкозы крови"