При соединении индоксила и тимола, в присутствии соляной кислоты, с полуторахлористым железом получается индиголигнон, характеризующийся розово-фиолетовой окраской.

Реактивы:
1) 20% раствор трихлоруксусной кислоты (употребляется для осаждения белков);
2) 5% раствор тимола в 95° спирте;
3) реактив Обермейера (5 г полуторахлористого железа; растворяют в 1 л крепкой соляной кислоты, с удельным весом 1,19);
4) хлороформ.

Методика определения. В сухую центрифужную пробирку с делениями вливают 4 мл испытуемой свежей сыворотки крови и прибавляют столько же 20% раствора трихлоруксусной кислоты (реактив № 1), смешивают жидкости, дают постоять 3—4 минуты, а затем центрифугируют в продолжение 10 минут. Полученную прозрачную жидкость сливают в сухую центрифужную пробирку с делениями.

Отметив количество этой жидкости, прибавляют 1 мл 5% спиртового раствора тимола (реактив № 2) и реактива Обер-мейера в количестве, равном полученной жидкости. Содержимое пробирки хорошо смешивают, закрывают пробкой и оставляют на час. Приливают 1 мл хлороформа, опять хорошо смешивают в продолжение одной минуты, после чего центрифугируют 4—5 минут.

Полученную жидкость над хлороформом отсасывают осторожно пастеровской пипеткой, а в пробирку с фиолетового цвета хлороформом вливают еще хлороформ и разводят до получения розоватого окрашивания его. В другую такую же чистую пробирку вливают чистый хлороформ, обе эти пробирки закрывают пробками и сравнивают их на белом фоне, отмечая различие розовато-фиолетово окрашенного хлороформа в испытуемой жидкости от цвета чистого хлороформа.
Отмечают по делениям на пробирке количество хлороформа, употребленного на разведение испытуемого раствора до слабого розовато-фиолетового цвета.

Количество индикана вычисляется следующим образом. Известно, что при наличии в 2 мл хлороформа 0,0032 мг индикана хлороформ окрашивается в слабо-розовато-фиолетовый цвет, если для исследования было взято 6 мл жидкости, т. е. 3 мл сыворотки крови, а для получения розовато-фиолетового цвета к хлороформу в испытуемой пробирке было прибавлено 5,4 мл чистого хлороформа, то количество индикана в 100 мл данной сыворотки будет: 0,032*5,4*100 / 2*3*1,6 = 0,18 мг%.

В знаменатель формулы вводят 1,6 потому, что при осаждении белков 20% трихлоруксусной кислотой по формуле получается индикана в 1,6 раз больше, чем в действительности.
В норме кровь содержит 0,026—0,08 мг% индикана. При кишечных заболеваниях и заболевании почек количество индикана в крови увеличивается.

- Читать далее "Гемометр Сали. Техника работы гемометром Сали"