Оксидазная реакция по Эпштейну (Epstein). При затруднении отличить лимфоциты от молодых форм гранулоцитов — миелобластов, а также для выявления в нейтрофилах и эозинофилах характерной зернистости пользуются оксидазной реакцией.

Необходимые реактивы:
1. Формалин (40% раствор) — 10 мл; этилового спирта (96°) — 90 мл.
2. Раствор из: а = нафтола— 1 г, 3% перекиси водорода 0,2 мл и 40° спирта 100 мл; сохраняется в темной бутылке.
3. Краска Романовского-Гимза.

Высушенный на воздухе мазок крови фиксируют в продолжение 3—5 минут реактивом 1, затем промывают дистиллированной водой 15—20 секунд, после чего на мазок наливают на 3 минуты реактив 2, хорошо промывают дистиллированной водой, высушивают и окрашивают краской Романовского-Гимза по обычному способу окраски мазков крови. Красят в продолжение 40—60 минут, смывают и высушивают.

При наличии в клетках фермента оксидазы зернистость окрашивается в ярко-зеленый цвет; реакция положительная: у нейтрофилов, эозинофилов, миелобластов, миелоцитов, моноцитов и др. Лимфоциты дают отрицательную реакцию на оксидазу.

Для изучения клеточного состава костного мозга пользуются мозгом из грудины, по методу М. И. Аринкина. Пункцию грудины производят специальными иглами. Наиболее удобной считается игла со щитком конструкции И. А. Кассирского.

Прокол производят по средней линии грудины. Щиток устанавливают на определенном расстоянии (у взрослых 1—1,2 см, у детей от 0,4 до 0,6 см) во избежание сквозного прокола грудины. Иглу кипятят, высушивают, чтобы не осталось в ней влаги, которая мешает при окрашивании препарата. Вводят в иглу мандрен. Производят местное обезболивание хлорэтилом и. с некоторым давлением делают прокол так, чтоб получился характерный хруст, означающий, что игла попала в костномозговую полость. Мандрен вытаскивают, к игле присоединяют шприц и насасывают 0,1—0,2 мл костного мозга, затем иглу вынимают и место прокола покрывают стерильной марлей и заклеивают лейкопластырем. Полученную массу пунктата быстро выливают из шприца на часовое либо предметное стекло. Смесителем для лейкоцитов набирают пунктат до деления 0,2 или 0,5 метки и набирают до метки 11 раствор уксусной кислоты, как для счета лейкоцитов. Из оставшегося материала делают на предметных стеклах тонкие мазки, высушивают, фиксируют в метиловом спирте 3—5 минут либо в смеси Никифорова 10— 15 минут и окрашивают по Романовскому-Гимза или Паппенгейму 20—30 минут.

Надо следить, чтобы дистиллированная вода, употребляемая при окраске, была нейтральная, так как при употреблении воды с повышенной кислотностью нейтрофильная зернистость лейкоцитов не окрашивается. Поэтому рекомендуется при окраске прибавлять к 100 мл дистиллированной воды 2—3 капли 1% раствора соды.

Смеситель с содержимым энергично встряхивают, заполняют камеру и подсчитывают количество всех ядерных элементов (лейкоциты и ядерные эритроциты). У здоровых людей насчитывали от 45 000 до 150 000 клеток в 1 мм? костномозгового вещества.

При исследовании костного мозга главное внимание уделяют изучению окрашенного препарата.

- Читать далее "Кровь при респираторных инфекциях. Белые клетки крови при инфекции"