Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Посев на плотные питательные среды. Селенитовые питательные среды

Для посева на плотные питательные среды используют стеклянный шпатель или проволоку (желательно платиновую) вмонтированную в специальную рукоятку, которая заканчивается петлей. При посеве на поверхность агара у края чашки наносят 1—2 капли исследуемого материала и растирают его непрерывными движениями шпателя на небольшом участке агара, после чего, оторвав шпатель от поверхности, продолжают растирание им же на оставшейся не засеянной части среды. Поверхность агара в чашке Петри может быть также засеяна петлей.

Нанесенный у края чашки исследуемый материал распределяют поочередно на каждой секторной четверти агара непрерывными движениями петли из стороны в сторону, повертывая чашку под углом 90°. Перед каждым последующим сектором петля должна стерилизоваться, благодаря чему достигается рост изолированных колоний.

В среды с бумажными полосками, пропитанными антибиотиками, посевной материал наносят на агар в зоне полосок, распределяя его вначале в этой зоне, а затем по остальной поверхности агара.

Посевы выращивают при температуре 37 С на пластинчатых питательных средах в течение 18—20 ч (48 ч на висмут-сульфит агаре), в средах обогащения максимальный срок инкубации посевов не должен превышать 18 ч (кроме желчи и крови). Это связано с тем, что обычно селективные среды обогащения недостаточно токсичны, чтобы полностью подавить рост эшерихий, энтерококков и других непатогенных микроорганизмов. Однако в первые 8—12 ч в селенитовой среде число эшерихий снижается, а после 12 ч эти бактерии начинают размножаться [Leifson E., 1936].
Теоретическим обоснованием этого феномена служат данпые II. П. Чижовой (1972), исследовавшей механизм селективного (для сальмонелл) действия указанной среды.

питательные среды

Как известно, рост бактерий в селенитовой среде сопровождается восстановлением селенита натрия до свободного селена, но какого-либо научного объяснения неодинакового токсического действия селена на энтеробактерии не приводилось. Оригинальными исследованиями Н. П. Чижовой были установлены различия в способах восстановления селена сальмонеллами и эшерихиями.

У первых этот продесс осуществляется влеклеточно, а у вторых — внутриклеточно, что и сопряжено с гибельными для клеток эшерихий изменениями в морфологической структуре и функциональной деятельности. Автором показано также, что свойственное эшерихиям внутриклеточное восстановление селена происходит лишь в первые 12 ч, в более поздние сроки отмечается появление и накопление селенитрезистентиых мутантов эшерихий, которые приобрели способность восстанавливать селен аналогично сальмонеллам.

Таким образом, выявленные Н. П. Чижовой закономерности являются теоретическим обоснованием необходимости непродолжительных (в пределах 12—18 ч) сроков выращивания посевов в селенитовой среде.

При целенаправленном исследовании на Y. enterocolitica и Т. pseudotuberculosis посевы в жидкую среду обогащения инкубируют в условиях холодильника (4 С), проводя первый высев из нее на плотную среду через 6—18 ч. Последующие высевы делают на 2-е сутки и затем через каждые 2—4 дня на протяжении 14 сут (при отрицательных результатах). Чашки с посевами для выделения иерсиний инкубируют при 25—26 °С, просматривая их через 18—20 ч и повторно на 2-е сутки.

Образцы всех исследуемых материалов желательно сохранять в холодильнике до следующего дня и при необходимости следует проводить повторный высев. При невозможности сохранения пробы в указанных условиях следует получить материал заново для повторного исследования. При слишком густом росте, затрудняющем выделение культуры, рекомендуется рассев в чашку с селективно-дифференциальной средой.
Помимо указанных общих правил посева исследуемого материала, требуется соблюдение особенностей посева соответственно характеру пробы.

- Вернуться в оглавление раздела "лабораторная диагностика"

Оглавление темы "Энтеробактерии и их диагностика":
1. Энтеробактерии. ДНК и генетика энтеробактерий
2. Реассоциация ДНК. Числовая таксономия
3. Классификаций энтеробактерий. Виды энтеробактерий
4. Проблемы классификации энтеробактерий. Принципы бактериологического исследования
5. Материал для бактериологического исследования. Забор материала для бакпосева
6. Кровь для бактериологического исследования. Бактериологический посев желчи, мочи, гноя
7. Бакпосев спинномозговой жидкости, операционного материала. Бактериологическое исследование мокроты, трупа
8. Выделение энтеробактерий. Идентификация энтеробактерий
9. Накопление энтеробактерий. Плотные питательные среды
10. Посев на плотные питательные среды. Селенитовые питательные среды