Для посева на плотные питательные среды используют стеклянный шпатель или проволоку (желательно платиновую) вмонтированную в специальную рукоятку, которая заканчивается петлей. При посеве на поверхность агара у края чашки наносят 1—2 капли исследуемого материала и растирают его непрерывными движениями шпателя на небольшом участке агара, после чего, оторвав шпатель от поверхности, продолжают растирание им же на оставшейся не засеянной части среды. Поверхность агара в чашке Петри может быть также засеяна петлей.

Нанесенный у края чашки исследуемый материал распределяют поочередно на каждой секторной четверти агара непрерывными движениями петли из стороны в сторону, повертывая чашку под углом 90°. Перед каждым последующим сектором петля должна стерилизоваться, благодаря чему достигается рост изолированных колоний.

В среды с бумажными полосками, пропитанными антибиотиками, посевной материал наносят на агар в зоне полосок, распределяя его вначале в этой зоне, а затем по остальной поверхности агара.

Посевы выращивают при температуре 37 С на пластинчатых питательных средах в течение 18—20 ч (48 ч на висмут-сульфит агаре), в средах обогащения максимальный срок инкубации посевов не должен превышать 18 ч (кроме желчи и крови). Это связано с тем, что обычно селективные среды обогащения недостаточно токсичны, чтобы полностью подавить рост эшерихий, энтерококков и других непатогенных микроорганизмов. Однако в первые 8—12 ч в селенитовой среде число эшерихий снижается, а после 12 ч эти бактерии начинают размножаться [Leifson E., 1936].
Теоретическим обоснованием этого феномена служат данпые II. П. Чижовой (1972), исследовавшей механизм селективного (для сальмонелл) действия указанной среды.

Как известно, рост бактерий в селенитовой среде сопровождается восстановлением селенита натрия до свободного селена, но какого-либо научного объяснения неодинакового токсического действия селена на энтеробактерии не приводилось. Оригинальными исследованиями Н. П. Чижовой были установлены различия в способах восстановления селена сальмонеллами и эшерихиями.

У первых этот продесс осуществляется влеклеточно, а у вторых — внутриклеточно, что и сопряжено с гибельными для клеток эшерихий изменениями в морфологической структуре и функциональной деятельности. Автором показано также, что свойственное эшерихиям внутриклеточное восстановление селена происходит лишь в первые 12 ч, в более поздние сроки отмечается появление и накопление селенитрезистентиых мутантов эшерихий, которые приобрели способность восстанавливать селен аналогично сальмонеллам.

Таким образом, выявленные Н. П. Чижовой закономерности являются теоретическим обоснованием необходимости непродолжительных (в пределах 12—18 ч) сроков выращивания посевов в селенитовой среде.

При целенаправленном исследовании на Y. enterocolitica и Т. pseudotuberculosis посевы в жидкую среду обогащения инкубируют в условиях холодильника (4 С), проводя первый высев из нее на плотную среду через 6—18 ч. Последующие высевы делают на 2-е сутки и затем через каждые 2—4 дня на протяжении 14 сут (при отрицательных результатах). Чашки с посевами для выделения иерсиний инкубируют при 25—26 °С, просматривая их через 18—20 ч и повторно на 2-е сутки.

Образцы всех исследуемых материалов желательно сохранять в холодильнике до следующего дня и при необходимости следует проводить повторный высев. При невозможности сохранения пробы в указанных условиях следует получить материал заново для повторного исследования. При слишком густом росте, затрудняющем выделение культуры, рекомендуется рассев в чашку с селективно-дифференциальной средой.
Помимо указанных общих правил посева исследуемого материала, требуется соблюдение особенностей посева соответственно характеру пробы.

- Вернуться в оглавление раздела "лабораторная диагностика"