Советуем для ознакомления:

Лаборатория:

Популярные разделы сайта:

Определение типа расщепления глюкозы бактериями. Оценка цитохромов бактерий

Определение типа расщепления глюкозы (OF-тест) проводят с помощью среды Хью — Лейфсона [Hugti R-, Leilson E. 1953]. В этой среде в качестве углевода использовала глюкоза, ферментация которой характерна для представителей семейства Enterobacleriaceae, хотя могут быть применены и другие углеводы. При ферментативном процессе исходное расщепление глюкозы происходит в анаэробных условиях первичным фосфорилированием до образования соединения глюкоза-6-фосфат. Окислительный процесс расщепления глюкозы в отличие от этого начинается не с фосфорилирования, а с прямого окисления карбоксильной группы с образованием глюконовой кислоты и протекает в присутствии атмосферного кислорода.

Для постановки OF-теста испытуемую культуру засевают уколом в столбик среды в двух пробирках, в одну из которых затем поверх среды наслаивают стерильное вазелиновое масло (0,5—1 мл). Посевы проводят иглой (или маленькой петлей), не доводя ее до дна пробирки на 5—6 мм, инкубируют при 37 °С в течение 1—4 сут. Так как в среду в числе других компонентов входит агар в небольшой концентрации (что создает полужидкую консистенцию среды) и индикатор рН — бромтимоловый синий (придающий среде зеленовато-оливковый цвет), при учете реакции могут быть определены не только окисление или ферментация углевода (глюкозы), но также газообразование и подвижность.

Изменение цвета среды в обеих пробирках на желтый свидетельствует о расщеплении глюкозы ферментацией (F), изменение аналогичного характера только в открытой пробирке (не залитой вазелиновым маслом) — об окислительном процессе (О), а сохранение неизменного цвета в обеих пробирках — об отсутствии какого-либо метаболизма глюкозы (—).

глюкозы и бактерии

Важными тестами, отличающими энтеробактерии от ряда других бактерий, являются также определение цитохромоксидазы и способности воесстанавливать нитраты в нитриты, свидетельствующей о присутствии у них нитратредуктазы.

Цитохромы — железосодержащие гемопротеиды, которые в завершающем этапе аэробного дыхания доставляют кислороду электроны (водород) с последующим образованием воды (Н20). Из числа цитохромов в составе некоторых грамотрицательных бактерий содержится цнтохром С. Благодаря ферменту оксидазе, свойственной аэробным или факультативно анаэробным микроорганизмам, происходит окисление цитохрома С, который способен использовать некоторые красители в качестве искусственных акцепторов водорода, обусловливая их переход в окрашенное состояние [Калина Г. П., 1982; Koneman Е. et al., 1979].

Классический метод определения наличия цитохромокендазы связан с именем Эрлиха и воспроизведен им на животных в 1885 г. Для выявления этого фермента у микроорганизмов на поверхность 18—20-часовой агаровой культуры наносят каплю 1% водного раствора пара-диметилфенилеидиамина и добавляют каплю 1 % спиртового раствора а-нафтола. При положительной реакции через I—3 мин появляется ярко-синее окрашивание, обусловленное образованием индофенола синего. Цитохромоксидазу (по Эрлиху) можно определять с помощью коммерческого бумажного индикатора (СИБ), выпускаемого Горьковским НИИ эпидемиологии и микробиологии РСФСР (в соответствии с прилагаемым к нему наставлением).

Классический метод выявления цитохромоксидазы подвергался модификациям. Одной из них является широко применяемый за рубежом метод Ковача, предусматривающий использование одного реактива—1% водного раствора пара-тетраметилфенилендиамина, который наносят на культуру (несколько капель). При положительной реакции через 20—30 с появляется темно-красное окрашивание, обусловленное переходом упомянутого реактива под воздействием окисленного цитохрома С в вурстеровский синий.

- Читать далее "Реакции на цитохромоксидазу бактерий. Дифференциация родов энтеробактерий"

Оглавление темы "Бактериологическое исследование энтеробактерий":
1. Техника посева на энтеробактерии. Методика отсева колоний
2. Отсев молодых колоний энтеробактерий. Цветное свечение колоний
3. Оценка индолобразования бактерий. Определение антигенов бактерий
4. Оценка морфологии бактерий. Окраска энтеробактерий по Граму
5. Определение типа расщепления глюкозы бактериями. Оценка цитохромов бактерий
6. Реакции на цитохромоксидазу бактерий. Дифференциация родов энтеробактерий
7. Ферментативные свойства энтеробактерий. Биохимические тесты дифференциации энтеробактерий
8. Дифференциальные тесты энтеробактерий. Комбинации биохимических тестов для энтеробактерий
9. Среда Симонса. Определение подвижности культур бактерий
10. Исследование культур сальмонеллезной природы. Антигены энтеробактерий