Выбор антигена-мишени и введение его в дендритные клетки

Онкология:

Популярные разделы сайта:

Выбор антигена-мишени и введение его в дендритные клетки

Наиболее важной проблемой при получении вакцин на основе дендритных клеток является выбор антигена, против которого желательно индуцировать иммунный ответ. Строго специфичные вакцины можно получить, обрабатывая дендритные клетки экзогенными синтетическими пептидами, которые представляют собой фрагменты известных опухолево-специфичных белков, например MAGE-1, MAGE-3, MUC1, Her-2/neu, тирозиназы, онкоэмбрионального антигена, Melan-A/MART. Для опухолей кроветворной системы в качестве мишени могут быть использованы пептиды—производные белка WT-1, который обнаруживается в бластных клетках больных ОМЛ, но не в других клетках взрослого организма, а также продукт гена PRAME или bcr-abl.

Использование синтетических пептидов значительно повышает концентрацию антигена на поверхности дендритных клеток, способствуя активации Т-лимфоцитов. Для повышения эффективности пептидов в некоторых случаях их модифицируют, повышая их аффинность к молекулам HLA. В противоопухолевом иммунном ответе существенную роль играют Т-киллеры, поэтому для создания вакцин используют пептиды, связывающиеся с HLA I класса и стимулирующие клетки CD8+. Однако в отсутствие стимуляции Т-хелперного звена противоопухолевый иммунный ответ может оказаться слабым. Некоторые исследователи вместе с синтетическими пептидами для обработки дендритных клеток применяют известный активатор Т-хелперов KLH (keyhole limpet hemagglutinin).

Использование пептидов лимитируется тем, что пептиды способны связываться только с определенными аллелями HLA, поэтому они пригодны для ограниченной категории больных. Кроме того, вакцинация против единичного пептида может приводить к селекции опухолевых клеток, не производящих этот пептид. Другой подход введения антигена в дендритные клетки — использование выделенных и очищенных или рекомбинантных опухолевых белков. Он позволяет преодолеть некоторые из указанных ограничений в использовании пептидов.

Иммуногенность обработанных белками дендритных клеток не зависит от гаплотипа больного, так как комплексы пептидов с молекулами HLA будут образовываться в результате внутриклеточного расщепления захваченных дендритными клетками белков. В клетках с большой вероятностью будут образовываться комплексы HLA — антиген, стимулирующие как Т-киллеры, так и Т-хелперы, презентироваться будут в основном доминантные пептиды, способные вызвать сильный иммунный ответ. Последнее положение не всегда является преимуществом. Если опухолево-ассоциированный антиген встречается не только в опухолевых клетках, но представлен и в здоровых тканях, организм больного может оказаться толерантным именно к сильно иммуногенным пептидам.

Одно из преимуществ использования синтетических пептидов — возможность индуцировать ответ на слабоиммуногенные пептиды — производные опухолевых маркеров, не вызывающие толерантность.

Альтернативный использованию целых белков подход — это введение в дендритные клетки ДНК или РНК, кодирующей опухолевые маркеры, или введение в дендритные клетки тотальной РНК опухолевых клеток.

Обработка дендритных клеток синтетическими пептидами или белками позволяет получать специфичные вакцины, однако при их использовании получены не самые обнадеживающие результаты. Отсутствие идентифицированных опухолево-специфических маркеров заставляет вернуться к обработке дендритных клеток экстрактами целых клеток или разрушенными опухолевыми клетками. При таком подходе снижается избирательность вакцины, но увеличивается вероятность выработки иммунной реакции против более широкого спектра антигенов и соответственно уменьшается вероятность ухода опухоли из-под контроля иммунной системы путем мутагенеза. Предлагается обрабатывать дендритные клетки лизатом опухолей, апоптотическими или некротическими клетками. Некоторые исследователи используют гибриды дендритных клеток и опухолевых клеток.

Особый подход к "дизайну" вакцин на основе дендритных клеток возможен при опухолях из клеток кроветворного происхождения. В 1994 г. опубликовано сообщение F. Santiago-Schwarz и соавт. о том, что бластные клетки больных ОМЛ могут приобретать свойства дендритных клеток. Основываясь на наблюдении, что лейкозные клетки происходят из ранних кроветворных предшественников, в 1997 г. другие исследователи проверили возможность индуцировать дифференцировку клеток CDla+ больных ХМЛ ех vivo, используя условия, необходимые для дифференцировки нормальных кроветворных предшественников в дендритные клетки. Было показано, что под воздействием ГМ-КСФ, ИЛ-4, ФНО или ионофора для Са2+ клетки больных ОМЛ в культуре также способны превращаться в дендритоподобные клетки.

На поверхности культивируемых бластных клеток выявляется высокий уровень экспрессии молекул HLA, костимуляторных молекул CD40, CD80 и CD86. В отдельных случаях удается получить CD83+ и показать, что эти клетки после связывания CD40 на их поверхности секретируют ИЛ-12. Дендритоподобные клетки больных ХМЛ и ОМЛ (лейкозные дендритные клетки, ЛДК) аналогично зрелым дендритным клеткам здоровых доноров, способны инициировать в культуре пролиферацию аллогенных лимфоцитов. ЛДК сохраняют хромосомные аберрации, присущие лейкемическому клону, из которого они получены. В ряде работ продемонстрировано, что ЛДК могут стимулировать опухолево-специфичный иммунный ответ в культурах аутологичных лимфоцитов больного. Установлено, что ЛДК проявляют миграционную активность, характерную для дендритных клеток.

С точки зрения потенциального использования ЛДК для иммунотерапии важно учитывать, что, как было показано, ЛДК отличаются по некоторым показателям от дендритных клеток здоровых доноров, а также, что свойства ЛДК индивидуальных больных могут различаться.

- Читать "Способ введения вакцины дендритных клеток и их эффективность"

Оглавление темы "Гематология":