Советуем для ознакомления:

Физиология:

Популярные разделы сайта:

Использование иммуносорбента для антигена. Оценка специфичности сорбции лиганда

С помощью иммуносорбента для антигена могут решаться задачи, имеющие существенное значение для молекулярной биологии. Приведем в качестве примера выделение на иммуносорбенте типа «сэндвич» полирибосом, синтезирующих легкие полипептидные цепи (Е. Сидорова и др., 1978). Сорбент был «нагружен» антителами против легких цепей иммуноглобулинов мыши.

Выделенные из клеток мышиной плазмацитомы полирибосомы для легких цепей (использовали технику градиентного центрифугирования) содержали растущие легкие цепи. Как следует из этой и других работ, растущие полипептидные цепи уже имеют, по крайней мере, часть антигенных детерминант, характерных для данной полипептидной цепи, поэтому растущая цепь избирательно связывается с иммобилизованными антителами против этой цепи, а вместе с ней связываются с иммуносорбентом полирибосомы, содержащие мРНК для легких цепей.

Теперь остается промыть иммуносорбент, путем фенольной экстракции выделить РНК. и очистить мРНК общепринятым способом. Описанный принцип или аналогичные методы извлечения мРНК позволяют получить препараты определенной информационной нуклеиновой кислоты свыше 90% чистоты.

Используемые в иммунохимии методы аффинной хроматографии не всегда основаны на реакции антиген-антитело. Например, исходя из высокого сродства к Fc-участку молекулы IgG белка А, продуцируемого Staphylococcus aureus, можно выделить из сложной смеси белков и других самых разнообразных по природе веществ, содержащихся в питательном бульоне, где выращивали стафилококк, именно белок А.
В качестве сорбента при этом используют иммобилизованный на сефарозе IgG человека. Белок А можно затем элюировать без потери активности раствором роданида натрия (И. Тарханова, Н. Сычева, 1980).

иммуносорбент и антиген

С помощью сорбента с иммобилизованным IgG из сыворотки (плазмы) можно извлечь Clq, а из лизата клеток селезенки — Fc-рецептор.
При любом способе аффинной хроматографии большое внимание должно быть уделено оценке степени специфичности сорбции лиганда. Здесь целесообразно привести некоторые примеры неспецифической сорбции различных веществ на нммуносорбентах, чтобы показать, какими многообразными знаниями необходимо обладать для выбора адекватного метода исследования.

В период становления техники иммуносорбции (конец 50-х годов) внимание специалистов привлек аминополистирол — коммерческий препарат низкой стоимости, который без особых затрат и потерн рабочего времени мог быть использован в качестве носителя для фиксации белковых антигенов. В самом деле, аминогруппы аминополистирола можно диазотировать нитритом натрия в разбавленной соляной кислоте. Затем с помощью реакции азосочетания в слабощелочной среде к полимеру можно ковалентно присоединить любые белки, содержащие тирозин.

Однако полученные таким способом иммуносорбенты связывали неспецифически значительные количества сывороточных иммуноглобулинов, видимо, за счет гидрофобных взаимодействий. От этого полимера как носителя пришлось отказаться.

- Читать далее "Неспецифическая сорбция. Регистрация реакции антиген (гаптен)-антитело"

Оглавление темы "Аутоиммунная патология. Исследование антител":
1. Аутоиммунные болезни. Толероген
2. Срыв толерантности иммунной системы. Аутоиммунные заболевания человека
3. Генетические факторы аутоиммунных заболеваний. Очистка иммуноглобулинов и антител
4. Высаливание иммуноглобулинов и антител. Осаждение спиртом и электрофорез антител
5. Хроматография иммуноглобулинов и антител. Специфическая очистка антител
6. Естественные иммуносорбенты. Аффинная хроматография в иммунологии
7. Использование иммуносорбента для антигена. Оценка специфичности сорбции лиганда
8. Неспецифическая сорбция. Регистрация реакции антиген (гаптен)-антитело
9. Метод равновесного диализа. Оптические методы выявления антигена-гаптена
10. Тушение флуоресценции антител. Спектрофлуорометрия и радиоспектроскопия
11. Что такое ЛФК (лечебная физическая культура)? Чем полезна?