Советуем для ознакомления:

Физиология:

Популярные разделы сайта:

Неспецифическая сорбция. Регистрация реакции антиген (гаптен)-антитело

Другим примером неспецифической сорбции может служить связывание третьего компонента комплемента такими поперечно сшитыми полисахаридами, как сефароза и сефадекс. Последние служат излюбленным носителем для самых разнообразных сорбентов, применяемых в целях аффинной хроматографии. Если сорбент на основе этих носителей применяется для извлечения какого-то белка из плазмы или сыворотки крови, может происходить неспецифическая сорбция третьего компонента комплемента.

Разнообразие методов очень велико. Все их можно разделить на две группы в зависимости от того, оценивается ли реакция с одновалентным гаптеном или поливалентным антигеном. В случае реакции антител с одновалентными гаптенами видимых превращений образующегося комплекса не происходит. В силу этого для его обнаружения приходится прибегать к различным физико-химическим или химическим методам, позволяющим оценить молекулярную массу, оптические» электрохимические или другие свойства реагирующих соединений и их комплексов. Что касается реакции поливалентных антигенов с антителами, то она может быть проведена при таких соотношениях реагентов, при которых возникнут легко регистрируемые визуально продукты: агглютннаты клеток, белковый преципитат («осадок).
Система может быть усложнена за счет комплемента, и тогда о результатах реакции судят по убыли комплемента в результате его связывания комплексом антиген-антитело.

Реакция гаптен-антитело. Равновесный диализ и его модификации. Техника постановки реакции состоит в следующем. В лвухкамерном сосуде камеры разделены мембраной, проницаемой для ннзкомолекулярного гаптена, но не антитела. Гаптен и антитело помещают в разные камеры. За счет диффузии гаптен, проходя через мембрану, переходит в камеру с антителом к нему и взаимодействует с антителом. В результате в камере, содержащей антитело, будет находиться как связанный, так и свободный гаптен. Количество последнего после установления равновесия окажется равным количеству гаптсна в камере, не содержащей антитела. Следовательно, в камере, содержащей антитело, возникнет инкремент концентрации гаптена, равный его количеству, связанному антителом.

неспецифическая сорбция

Зная содержание антитела в молях и определив содержание свободного и связанного гаптена, можно определить константу равновесия (К) из уравнения: r/с = nК—rК, где r—число молей гаптена на моль антитела, с—молярная концентрация свободного гаптена, п — число активных центров в молекуле антитела. Не обсуждая здесь методы регистрации концентрации гаптеиа (см. ниже), отметим, что отношение г, К и с нелинейно вне зависимости от степени чистоты антител в том случае, если последние немоноклональны или, иными словами, неоднородны по степени сродства к гаптену. Следовательно, оперируя поликлональными антителами, можно определить среднее значение величины К для всей совокупности активных центров. Степень неоднородности антител по величине сродства к гаптену (индекс гетерогенности а) можно вычислить по формуле log r(n—r) =а logK0 + alog с.

Значение величины а = 0,7 достаточно типично. При этом около 25% активных центров имеет величину константы равновесия, в шесть раз превышающую среднюю константу связывания К0. Остальные 75% антител имеют величины К в пределах между K0/6 и 6K0 Только для моноклональных антител величина а принимает значение, равное 1.
Сказанное выше применимо также и к оценке результатов реакции гаптен-антитело другими методами.

- Читать далее "Метод равновесного диализа. Оптические методы выявления антигена-гаптена"

Оглавление темы "Аутоиммунная патология. Исследование антител":
1. Аутоиммунные болезни. Толероген
2. Срыв толерантности иммунной системы. Аутоиммунные заболевания человека
3. Генетические факторы аутоиммунных заболеваний. Очистка иммуноглобулинов и антител
4. Высаливание иммуноглобулинов и антител. Осаждение спиртом и электрофорез антител
5. Хроматография иммуноглобулинов и антител. Специфическая очистка антител
6. Естественные иммуносорбенты. Аффинная хроматография в иммунологии
7. Использование иммуносорбента для антигена. Оценка специфичности сорбции лиганда
8. Неспецифическая сорбция. Регистрация реакции антиген (гаптен)-антитело
9. Метод равновесного диализа. Оптические методы выявления антигена-гаптена
10. Тушение флуоресценции антител. Спектрофлуорометрия и радиоспектроскопия