Советуем для ознакомления:

Физиология:

Популярные разделы сайта:

Меченные иминоксильными радикалами гаптены. Реакция антиген-антитело

Метод нашел практическое применение, в частности, для массового иммунологического определения морфина в моче (США). К наркотику были получены антитела и использованы в тест-системе после присоединения иминоксильного радикала. Пробы мочи освобождали от соли и добавляли к антителам против морфина. Если в моче содержался наркотик, он блокировал активные центры антител.

Тогда добавленный в качестве компонента тест-системы морфии, меченный имипокеильным радикалом, оставался несвязанным и спектр метки соответствовал спектру иминоксила в растворе. При отсутствии морфина в моче происходила иммобилизация иминоксила. входящего в состав тест-гаптена.

Меченные импноксильными радикалами гаптены нашли применение в изучении размера полости активного центра антитела (J. Hsia, L. Piette, 1969). Готовили производные гаптена (например, динитрофенильного), отличающиеся между собой длиной алифатической цепи, к одному концу которой присоединяли динитрофенильную группу, а к другому — иминоксильную группу. Длина соединяющей две группировки «ножки» варьировала от 0,8 до 1,7 нм.

При длине «ножки» вместе с динитрофенильной группой, равной 1,0 нм, вращательные движения иминоксильного радикала в присутствии динитрофенильных антител существенно ограничивались. Это свидетельствовало в пользу иммобилизации радикала в активном центре антитела. Но стоило увеличить длину ножки еще на 0,2 нм, как ограничения для вращательных движений радикала резко уменьшались. Из этих опытов следовало, что протяженность центра для динитрофенильной группы составляет 1,0—1,2 нм.

радикальные гаптены

Реакция антиген-антитело. Преципитация. Образование нерастворимого комплекса при смешивании высокодисперсного антигена с антителами называют преципитацией. Этот феномен достаточно сложен по своему механизму. Выяснено, что наиболее эффективно преципитируют антиген антитела М-класса.

К ним приближаются по активности антитела, принадлежащие к иммуноглобулинам класса G. М. Гейдельбергер и Д. Кендалл (М. Heidelberger, D. Kendall, 1937) разработали количественный метод реакции преципитации и описали основные закономерности реакции применительно к антителам IgG-класса.

В том случае, когда к постоянному количеству антитела добавляют возрастающие количества антигена, количество преципитата будет возрастать до определенного максимума. Затем с увеличением дозы антигена количество преципитата начнет уменьшаться вплоть до его полного исчезновения. Удалив преципитат, в надосадочной жидкости можно определить налиантнтела.

Опыт показывает, что в пробах, соответствующих левой части кривой (прежде всего в начальной ее части), весь добавленный антиген находится в преципитате, а в надосадочной жидкости присутствуют антитела. В точке, соответствующей максимальному содержанию преципитата, весь добавленный антиген и все антитела, содержавшиеся в пробе, находятся в преципитате. В пробах, соответствующих правой части кривой, в надосадочной жидкости содержится свободный антиген. Соотношение реагентов, соответствующее образованию максимального количества преципитата, называют точкой эквивалентности.
Определив в этой точке содержание белка в преципитате и вычтя из полученной величины количество добавленного антигена (если это белок), получают содержание антител в анализируемом объеме антисыворотки.

- Читать "Теория количественной преципитации. Первая иммунологическая реакция"

Оглавление темы "Количественное и качественное определение антител":
1. Меченные иминоксильными радикалами гаптены. Реакция антиген-антитело
2. Теория количественной преципитации. Первая иммунологическая реакция
3. Реакция преципитации в геле. Метод двойной диффузии в агаре
4. Метод радиальной иммунодиффузии. Иммуноэлектрофорез
5. Активная и пассивная гемагглютинация. Реакция связывания комплемента
6. Связывание комплемента иммунным комплексом. Радиоиммунологические методы исследования антител
7. Модификации радиоиммунного анализа. Метод инактивации фага
8. Иммуноферментный анализ. Иммунохимические методы в биохимии
9. Метод модификации гаптенами рибосомных белков. Метод иммуноэлектронной микроскопии
10. Рецепторы для гормонов. Антиидиотипические антитела