Советуем для ознакомления:

Физиология:

Популярные разделы сайта:

Теория количественной преципитации. Первая иммунологическая реакция

Основные расчеты основаны на теории количественной преципитации, разработанной М. Гейдельбергером и Д. Кендаллом. Ими впервые доказано, что в состав преципитата не вовлекаются никакие сывороточные белки, за исключением антител. Разумеется, в состав преципитата могут быть вовлечены компоненты системы комплемента: Clq и С3b. Чтобы исключить это, из сыворотки предварительно удаляют комплемент (например, другим иммунным комплексом) или инактиви-руют его прогреванием сыворотки при 56СС в течение 30 мин.

Содержание антител в пробе, соответствующей любой точке зоны избытка антител, можно определить по формуле Abп=ах — bх2, где Аbп— количество антител в преципитате, х — количество добавленного антигена, а и b — константы, величины которых находят по графику. Величину а находят по точке пересечения экспоненты с осью ординат. Величина b равна тангенсу угла наклона экспериментальной кривой к оси абсцисс.
Выразив отношение Аbn\х через R, значение Аbп находят из уравнения Abn=2Rx— R2a2iA, где А — количество преципитата в точке эквивалентности.

Указанное уравнение основано на законе действующих масс. Оно применимо для описания реакции количественной преципитации только в зоне избытка антител и точке эквивалентности.
Реакция количественной преципитации является первой иммунологической реакцией, учет результатов которой является строго количественным, поскольку без количественного учета реакций невозможно введение химических представлений в любую биологическую дисциплину.

количественная преципитация

Реакция преципитации не принадлежит к числу чувствительных реакций определения антител (антигена). Если концентрация антител в пробе ниже 0,5 мг/мл, преципитат образуется медленно. Для полноты осаждения комплекса пробы приходится оставлять на холоду на несколько суток. При низкой концентрации антител преципитат вообще не выпадает. Однако агрегация антител антигеном все же идет и, чтобы ее оценить, прибегают к технике нефелометрии. Прибор основан на оценке степени рассеивания света, в качестве источника которого служат либо ртутные лампы, либо лазеры. Благодаря большой мощности монохроматического излучения, обеспечиваемого лазером (например, гелий-неонового), удается зарегистрировать даже небольшую степень рассеяния света.

Согласно принятой технике нефелометрии оценивают интенсивность светорассеяния при соотношении антиген-антитело, соответствующему зоне избытка антител. В этом случае метод используют для количественного определения не антител, а антигена. Время предварительной инкубации смеси реагентов от нескольких минут до 1 ч.

Изучение теоретических основ реакции преципитации оказалось важной вехой как в изучении строения и свойств антител, так и в исследовании механизма реакции антиген-антитело. Имеются основания утверждать, что при взаимодействии антител с поливалентным антигеном происходит образование «решетки», напоминающей кристаллическую. По данным электронной микроскопии, антитела, участвующие в формировании преципитата, имеют Т-образную форму, т. е. угол между Fab-участками молекулы достигает 180°. Это существенно для формирования самой решетки и придании ей достаточной степени жесткости. Важная роль принадлежит при этом району «талии». При разрушении межцепьевых дисульфидных связей в этом районе антитела еще сохраняют способность преципитировать антиген, по время формирования преципитата резко возрастает.

Необходимо подчеркнуть, что антитела разного видового происхождения, относящиеся к иммуноглобулинам G, по-разному ведут себя в реакции преципитации. Так, комплексы, образованные антителами лошади против белковых антигенов (например, против бактериальных токсинов), растворимы в избытке антитела (феномен прозоны). Это можно связать с большим электрическим зарядом IgG-антител лошади в сравнении с IgG-антителами кролика той же специфичности и, как следствие этого, их большей растворимостью.

- Читать "Реакция преципитации в геле. Метод двойной диффузии в агаре"

Оглавление темы "Количественное и качественное определение антител":
1. Меченные иминоксильными радикалами гаптены. Реакция антиген-антитело
2. Теория количественной преципитации. Первая иммунологическая реакция
3. Реакция преципитации в геле. Метод двойной диффузии в агаре
4. Метод радиальной иммунодиффузии. Иммуноэлектрофорез
5. Активная и пассивная гемагглютинация. Реакция связывания комплемента
6. Связывание комплемента иммунным комплексом. Радиоиммунологические методы исследования антител
7. Модификации радиоиммунного анализа. Метод инактивации фага
8. Иммуноферментный анализ. Иммунохимические методы в биохимии
9. Метод модификации гаптенами рибосомных белков. Метод иммуноэлектронной микроскопии
10. Рецепторы для гормонов. Антиидиотипические антитела