Советуем для ознакомления:

Физиология:

Популярные разделы сайта:

Реакция преципитации в геле. Метод двойной диффузии в агаре

Преципитация комплекса антиген-антитело непосредственно в инертном геле (как правило, агаре или агарозе) нашла широкое применение для анализа антигенов. Современные модификации метода основаны на том, что взаимодействие антигена и антитела происходит непосредственно в толще геля, куда реагирующие соединения поступают за счет диффузии. Для этого гель не должен быть слишком плотным, обычно готовят 0,7—1,0%-ные гели.

Широко используемый метод двойной диффузии в агаре, предложенный О. Ухтерлони (О. Ouchterlony, 1948), состоит в том, что антиген (ы) и антитело(а) помещают в лунки, проделанные в тонком слое геля на небольшом расстоянии друг от друга. Зона преципитации проницаема для антигенов и антител, не взаимодействующих с теми, которые образовали преципитат. В результате может образоваться несколько зон преципитации, каждая из которых соответствует индивидуальному антигену и антителам к нему.

Положение зоны преципитации относительно лунок с антигеном и антителом зависит от двух факторов: коэффициента поступательной диффузии данного вещества и его концентрации. Коэффициент диффузии определяется, как известно, размером и формой молекулы. Концентрационная зависимость зоны преципитации определяется необходимостью достижения эквивалентных отношений реагентов для эффективного формирования преципитата.

преципитация в геле

Помимо выявления антигенной неоднородности метод двойной диффузии в геле позволяет сравнить антитенное строение нескольких веществ и выявить наличие сходства и различий между ними. Как всякий иммунологический метод, метод двойной диффузии в геле имеет ограничения, основное из которых — спектр антител в исследуемой антисыворотке. Так, в ранних работах при сравнительном изучении антигенного строения IgG кролика и его Fab- и Fc-фрагментов использовали антисыворотку против IgG кролика, полученную от коз.

Исследователям не было тогда известно, что животные этого вида не образуют практически антител против детерминант Fab-участка молекулы. Поскольку при использовании этой антисыворотки Fc-фрагмент давал реакцию антигенной идентичности с нерасщепленнои молекулой IgG, сделали ошибочное заключение об отсутствии в Pab-участке видоспецифическнх антигенных детерминант. Ошибка была исправлена после исследования фрагментов молекулы IgG с помощью антииммуноглобулиновых сывороток, полученных от животных других видов.

В антисыворотке осла против IgG кролика содержится примерно равное количество антител против антигенных детерминант Fab- и Fc-участком. На этом примере можно еще раз убедиться в необходимости использования при антигенном анализе антисывороток, полученных от животных разных видов.

- Читать "Метод радиальной иммунодиффузии. Иммуноэлектрофорез"

Оглавление темы "Количественное и качественное определение антител":
1. Меченные иминоксильными радикалами гаптены. Реакция антиген-антитело
2. Теория количественной преципитации. Первая иммунологическая реакция
3. Реакция преципитации в геле. Метод двойной диффузии в агаре
4. Метод радиальной иммунодиффузии. Иммуноэлектрофорез
5. Активная и пассивная гемагглютинация. Реакция связывания комплемента
6. Связывание комплемента иммунным комплексом. Радиоиммунологические методы исследования антител
7. Модификации радиоиммунного анализа. Метод инактивации фага
8. Иммуноферментный анализ. Иммунохимические методы в биохимии
9. Метод модификации гаптенами рибосомных белков. Метод иммуноэлектронной микроскопии
10. Рецепторы для гормонов. Антиидиотипические антитела