Советуем для ознакомления:

Физиология:

Популярные разделы сайта:

Метод радиальной иммунодиффузии. Иммуноэлектрофорез

Одним из часто применяемых в настоящее время вариантов реакции преципитации з геле является метод радиальной иммунодиффузии. Он был разработай Дж. Фэйи (J7~Fahey, 1965) и Г. Манчини (G. Mancini, 1965) для количественного определения антигенов. При постановке реакции этим методом первоначально готовят гель, содержащий ангисыворотку в разведенном виде (1:50— 1 : 200). В тонком слое такого геля проделывают лунки, в которые вносят антиген в различных концентрациях. Диффундируя в гель, антиген реагирует с содержащимися в нем антителами и образует преципитат в форме кольца вокруг лунки с антигеном. Так как преципитат выпадает при эквивалентных соотношениях реагентов, диаметр кольца будет неодинаков вокруг лунок, содержащих различные количества антигена. Чем больше концентрация антигена, тем больший диаметр будет у образующегося кольца преципитации.

Сравнивая кольцо преципитации образца антигена, концентрация которого не известна, с кольцами преципитации стандартного антигена, по калибровочной кривой находят его концентрацию. Метод особенно широко применяется с тех пор, как ряд фирм стал выпускать готовые пластины геля с антисыворотками и необходимые стандарты.

Иммуноэлектрофорез. Метод, введенный П. Грабаром (P. Grabar et al., 1956), сочетает высокую разрешающую способность электрофоретического анализа макромолекул со специфичностью их выявления с помощью реакции преципитации в геле. Исследуемый образец подвергают электрофорезу в геле агара или агарозы. Затем параллельно оси движения исследуемых веществ в электрическом поле проделывают в геле траншею и заполняют ее антисывороткон. При встречной диффузии в геле антитела и антигены, подвергнутые электрофорстическому разделению, образуют зоны преципитации в форме дуг.
Существует большое число модификаций основного метода, имеющих целью повысить его чувствительность. К ним относятся противоточный и двухмерный электрофорез, радиоиммуноэлектрофорез и др.

иммунодиффузия

Агглютинация. Агрегация низкодисперсных (нерастворимых) антигенов с помощью антител называется агглютинацией. Антигенами могут быть бактерии, клетки крови (чаще всего эритроциты), другие клетки. Если антитела направлены против антигенов, являющихся составной частью бактериальной стенки или клеточной мембраны, реакцию обозначают как активную (активная агглютинация). Пассивной называют агглютинацию клеток антителами против антигенов, сорбированных или присоединенных ковалентно к клеточной мембране (обычно эритроцита). Во всех случаях, когда речь идег об агглютинации эритроцитов, реакцию называют гемагглютинацией (активная или пассивная).

Реакция агглютинации по своему механизму не отличается от реакции преципитации. «Сшивка» бивалентными или поливалентными антителами (IgG или IgM) приводит к формированию «решетки». В силу несоизмеримо больших размеров корпускулярного антигена по сравнению с молекулой антитела поперечная сшивка, например, двух соседних эритроцитов может оказаться недостаточной для их фиксации. Устойчивость агрегата растет по мере формирования «решетки», обеспечивающей связывание клеток по многим точкам. Именно поэтому поливалентные антитела намного эффективнее агглютинируют антигены в сравнении с бивалентными. Так, IgM-гемагглютнннпы более чем в 1000 раз активнее в реакции гемагглютинацни, чем IgG-гемагглютинины.

Реакция агглютинации не имеет строго количественного учета. Однако практическая ценность ее столь велика, что и по сей день она остается важным инструментом как в руках исследователя, так и врача-лаборанта.

- Читать "Активная и пассивная гемагглютинация. Реакция связывания комплемента"

Оглавление темы "Количественное и качественное определение антител":
1. Меченные иминоксильными радикалами гаптены. Реакция антиген-антитело
2. Теория количественной преципитации. Первая иммунологическая реакция
3. Реакция преципитации в геле. Метод двойной диффузии в агаре
4. Метод радиальной иммунодиффузии. Иммуноэлектрофорез
5. Активная и пассивная гемагглютинация. Реакция связывания комплемента
6. Связывание комплемента иммунным комплексом. Радиоиммунологические методы исследования антител
7. Модификации радиоиммунного анализа. Метод инактивации фага
8. Иммуноферментный анализ. Иммунохимические методы в биохимии
9. Метод модификации гаптенами рибосомных белков. Метод иммуноэлектронной микроскопии
10. Рецепторы для гормонов. Антиидиотипические антитела