Советуем для ознакомления:

Физиология:

Популярные разделы сайта:

Связывание комплемента иммунным комплексом. Радиоиммунологические методы исследования антител

Связывание комплемента иммунным комплексом, содержащим эритроциты, нашло широкое применение для обнаружения клеток, синтезирующих антитела. Метод локального гемолиза в геле, предложенный Н. Ерне (N. Jerne, С. Henry, 1963), основан на реакции комплементзависимого гемолиза эритроцитов после сенсибилизации эритроцитов антителами, продуцируемыми отдельными клетками.
В расплав агара или агарозы вносят взвесь клеток селезенки или лимфоузла от животного, иммунизированного ксеногенными эритроцитами.

В агар добавляют также большой избыток тех же эритроцитов. Агар разливают тонким слоем в чашки Петри и инкубируют последние 1 ч при 37° С. За этот срок антителопродуцирующие клетки секретируют некоторое количество антител, которые присоединяются к окружающим клетку эритроцитам. Затем на чашки наслаивают раствор комплемента и снова инкубируют их при 37° С. Комплемент диффундирует в агар и, связываясь эритроцитами, сенсибилизированными антителами, вызывает их лизис.

При просмотре чашек невооруженным глазом будут видны круглые зоны просветления в агаре, число которых соответствует числу антителопродуцирующих клеток. Метод может быть применен для определения клеток, продуцирующих антитела против самых разнообразных антигенов. Антигены или гаптены при этом фиксируют на поверхности эритроцитов, засеваемых в агар. После связывания антител против соответствующего антигена эритроциты в присутствии комплемента лизируются (так называемый пассивный гемолиз).

иммунный комплекс

Радиоиммунологические методы. Это наиболее чувствительные из широко используемых в лабораторной практике методов регистрации реакции антиген-антитело. Существует много модификаций метода, по принцип един: либо антиген, либо антитела метят радиоизотопами и судят о протекании реакции, измеряя радиоактивность водонерастворимого комплекса.

Чаще всего в настоящее время антиген или антитела метят радиоактивным иодом (125I). Иод включается по остаткам тирозина, причем, как правило, образуется дииодтирозин. При этом стремятся ввести в молекулу антитела (белковый антиген) следовые количества иода — несколько атомов на молекулу. В противном случае может произойти значительное изменение структуры и свойств антитела или антигена.

Самый простой случай применения радиомеченого антигена, например сывороточного альбумина,— определение антител к этому антигену в исследуемой антисыворотке. Меченый 125I-альбумин прибавляют к антисыворотке. Смесь инкубируют около 1 ч, после чего осаждают сывороточные иммуноглобулины сульфатом аммония при 40%-ном насыщении. Поскольку альбумин не осаждается указанными концентрациями сульфата аммония, его присутствие в преципитате может быть следствием только формирования комплекса между альбумином и антителами к нему.

- Читать "Модификации радиоиммунного анализа. Метод инактивации фага"

Оглавление темы "Количественное и качественное определение антител":
1. Меченные иминоксильными радикалами гаптены. Реакция антиген-антитело
2. Теория количественной преципитации. Первая иммунологическая реакция
3. Реакция преципитации в геле. Метод двойной диффузии в агаре
4. Метод радиальной иммунодиффузии. Иммуноэлектрофорез
5. Активная и пассивная гемагглютинация. Реакция связывания комплемента
6. Связывание комплемента иммунным комплексом. Радиоиммунологические методы исследования антител
7. Модификации радиоиммунного анализа. Метод инактивации фага
8. Иммуноферментный анализ. Иммунохимические методы в биохимии
9. Метод модификации гаптенами рибосомных белков. Метод иммуноэлектронной микроскопии
10. Рецепторы для гормонов. Антиидиотипические антитела