Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Трансляция паповавирусов. Репликация ДНК паповавирусов

Вирионы полиомы содержат шесть или семь полипептидов, из которых три наиболее мелких, богатых основными аминокислотами, возможно, являются полипептидами клетки-хозяина. 90%) белков, синтезируемых в зараженных клетках, — это белки хозяина; два основных вирусных структурных полипептида (см. гл. 3) составляют большую часть остающихся 10%. Структурные белки относятся к поздним белкам, так ,как их синтез возможен только после начала синтеза вирусной ДНК (Рапп и др., 1945).

Как вирус полиомы, так и вирус SV40 синтезируют вирус-специфические Т-антигены. Их можно определить методом флуоресцирующих антител в ядрах трансформированных или продуктивно инфицированных клеток (Хэбел, 1965; Блэк и др., 1963). Т-антигены появляются через 6—10 ч после заражения до появления вирионных антигенов. Синтез Т-антиге-нов не подавляется цитозинарабинозидом, т. е. соответствующие мРНК синтезируются на родительском вирусном геноме. Функции Т-антигенов в размножении вирусов или клеточной трансформации неизвестны.

Описаны и неструктурные полипептиды вирусов (Андерсон и Джестленд, 1972; Уолтер и др., 1972), однако не исключено, что они являются ферментами хозяина, индуцируемыми вирусом.

Репликация ДНК паповавирусов

Интактная зрелая форма ДНК паповавирусов (компонент I) представляет собой ковалентно замкнутую кольцевую двухцепочечную молекулу. Для того чтобы идентифицировать и охарактеризовать репликативныи предшественник ДНК вирусов иолиомы и SV40, были приложены значительные усилия. Основной подход в данных исследованиях состоял в импульсном мечении зараженных клеток радиоактивным тимидином, выделении предшественников с помощью равновесного центрифугирования и их исследовании электронно-микроскопическим и физико-химическими методами.

паповавирусы

Предположение о том, что ДНК паповавирусов реплицируется согласно модели Кэрнса (Бурго и др., 1971; Левин и др., 1970), осложняется существованием кольцевых олигомеров и катенатных молекул (Кьюзин и др., 1970; Иениш и Левин, 1971). Однако как те, так и другие, возможно, вообще не являются репликативными формами, а возникают в результате рекомбинаций между кольцевыми молекулами. Больших успехов в изучении репликации ДНК SV40 достигли Себринг и др. (1971), которые описали не известный ранее репликативныи предшественник (РП), по всей вероятности, представляющий собой обязательную промежуточную репликативную форму.

Определяя число репликативных форм, аналогичных описанным другими исследователями, авторы заметили, что чаще всего молекулы содержат две точки ветвления, три ветви, не содержат свободных концов и имеют сверхспиральный участок в нереплицированной части молекулы. Подобная форма молекул была также описана в работе Иениша и др. (1971).

Выделив меченные изотопами молекулы РП с помощью сахарозных градиентов, Себринг и др. показали, что в этих молекулах вновь синтезированная ДНК SV40 нековалентно связана с родительскими цепями ДНК и что родительские цепи ДНК ковалентно замкнуты.

Важную для понимания репликации кольцевых молекул ДНК проблему, которая ждет своего разрешения, представляет собой проблема расплетания родительской двухцепочечной молекулы. При репликации ковалентно замкнутых кольцевых молекул расплетание ДНК должно вызывать образование сверхспиральных витков, и, следовательно, по мере продолжения репликации расплетание родительских цепей должно затрудняться. Для того чтобы объяснить это явление, было постулировано существование «шарнира» (Кэрнс, 1963).

Поскольку при щелочном рН родительские цепи в составе РП остаются ковалентно замкнутыми, Себринг и др. (1971) предположили, что такие молекулы не имеют постоянного шарнирного сочленения в нереплицированном районе. Авторы выдвинули гипотезу о временном шарнире, обусловленном чередующимся действием двух ферментов — расщепляющей эндонуклеазы и лигазы, сшивающей разрыв после каждой стадии синтеза ДНК. При таком объяснении репликативные предшественники, выделенные из клетки в любой данный момент, могут не содержать шарнира. После репарации, для которой в клетках, зараженных SV40, индуцируется соответствующая полинуклеотидлигаза (Сэмбрук и Шаткин, 1969), репликация не может продолжаться до тех пор, пока не будет внесен очередной разрыв.

Особый интерес представляет недавнее обнаружение в мышиных эмбриональных клетках белка, который способен раскручивать замкнутые кольцевые ДНК, содержащие сверхспиральные витки (Шампу и Дульбекко, 1972). Белок, по-видимому, способствует появлению одноцепочечных разрывов в ДНК. При этом образуется комплекс ДНК—белок, благодаря чему разрешается вращение цепей ДНК относительно оси спирали. По завершении раскручивания концы цепи в месте разрыва сшиваются. Подобная активность, возможно, и обусловливает существование постулированного шарнира.

- Читать далее "Интеграция клеточного и вирусного геномов. Интегративность паповавирусов"

Оглавление темы "Паповавирусы. Аденовирусы":
1. Цикл размножения паповавирусов. Транскрипция паповавирусов
2. Трансляция паповавирусов. Репликация ДНК паповавирусов
3. Интеграция клеточного и вирусного геномов. Интегративность паповавирусов
4. Сборка и выход паповавирусов из клетки. Метаболизм зараженных паповавирусами клеток
5. Цикл размножения аденовирусов. Начальные стадии аденовирусной инфекции
6. Транскрипция аденовирусов. Механизмы транскрипции аденовирусов
7. Трансляция аденовирусов. Этапы трансляции аденовирусов
8. Репликация аденовирусной ДНК. Сборка и выход аденовируса из клетки
9. Изменение метаболизма инфицированного аденовирусом клетки. Цикл размножения герпесвирусов
10. Начальные стадии герпесвирусной инфекции. Транскрипция герпесвирусов