Аденовирусы весьма удобны для вирусологических исследований благодаря легкости, с которой можно получить и очистить большие количества вирионов и их компонентов. Структурные белки и ДНК аденовирусов изучены довольно подробно, однако информация о неструктурных белках, на кодирование которых затрачивается, по-видимому, две трети кодирующего потенциала генома, все еще невелика.

В лабораторных исследованиях с применением культивируемых клеток наиболее широко используются два аденовируса: вирусы человека типов 2 и 5 (Шлезингер, 1969; Грин и др., 1970); большая часть приводимых ниже данных относится именно к этим вирусам.

Высокие выходы аденовируса (до 104 БОЕ на клетку) можно получить при заражении суспензионных культур клеток KB или определенных линий «леток HeLa. Титрование вируса методом бляшек проводят на монослойных культурах клеток KB или почек эмбриона человека. Сборка происходит в ядре, где обнаруживаются большие агрегаты вирионов, не высвобождающиеся из него вплоть до разрушения некротизированной клетки.

Цикл размножения аденовирусов продолжителен: период эклипса меняется в зависимости от системы клетка — вирус или множественности инфекции, но обычно он длится 13—18 ч.

Прикрепление вируса может происходить при температуре 0—4°С, что было показано при смешивании высокоочищенных радиоактивных вирионов с концентрированными суспензиями клеток. Однако последующие стадии, проникновение и эклипс, не начинаются до тех пор, пока температура не будет повышена примерно до 37 °С. Возможно, посредством удлиненных нитей, отходящих от вершин вириона, вирус контактирует с участками присоединения на клеточной поверхности, так как рецепторные участки могут связывать очищенный антиген нитей аденовируса типа 2 и при этом инактивироваться им (Шлезингер, 1969).

В клетке существует около 104 аденовирусных рецепторов; избирательность их разрушения различными протеазами свидетельствует о том, что они отличны от пикорнавирусных рецепторов (Филипсон и др., 1968).

После того как аденовирус прикрепится к клетке, он быстро попадает внутрь путем поглощения фагоцитарной вакуолью (Шардонне и Дейлс, 1970а) или непосредственно проникая в цитоплазму (Морган и др., 1969). В зависимости от эндоцитозной активности используемых клеток преимущество получает тот или иной механизм. Меченные изотопами частицы аденовируса типа 5, выделенные вскоре после попадания в цитоплазму, имеют плавучую плотность (1,35 г/см3), несколько превышающую плотность интактных вирионов (1,34 г/см3), что связано с потерей около 5% исходного белка вириона (Зуссенбах, 1967), возможно антигена пентона из вершин частицы.

Эта потеря белка, которая происходит в течение 5 мин после прикрепления, не зависит от синтеза новых ферментов (Лоуренс и Гипсберг, 1967; Зуссенбах, 1967) и сопровождается исчезновением инфекционности.

Анализ субклеточных фракций клеток, зараженных радиоактивным аденовирусом, с помощью методов градиентного центрифугирования и электронной микроскопии показывает, что измененные частицы попадают внутрь клеточного ядра (Шардонне и Дейлс, 1972). Здесь они быстро теряют более двух третей исходного вирионного белка и превращаются в частицы, которые соответствуют вирусным «сердцевинам», образуемым in vitro при обработке мочевиной (Лонгберг-Холм и Филипсон, 1969). Затем в практически свободной от белка форме высвобождается вирусная ДНК. Весь процесс, от прикрепления вируса до высвобождения вирусной ДНК в ядре, в основном завершается в течение 1 ч.

- Читать далее "Транскрипция аденовирусов. Механизмы транскрипции аденовирусов"