Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Исследование вирусного генома. Методы анализа вирусного генома

Несмотря на большие усилия, направленные на изучение генетики вирусов животных, за весь период после 1950 г. в области генетического картирования сделано немногим больше, чем в работе с бактериофагами за первые два года после открытия рекомбинации между мутантами фагов. Основная причина столь медленного продвижения — неудовлетворительная природа использованных систем. Трудности возникали отчасти по вине самих исследователей, которые выбирали вирусы по их важности для медицины или ветеринарии, а не по их пригодности для генетического анализа.

Однако большая часть затруднений связана с самой природой животных клеток. Клетки-хозяева для изучения бактериофагов — это гаплоидные одиночные клетки, генотип которых доступен для экспериментального контроля. Хотя животные клетки можно клонировать и методы генетики соматических клеток непрерывно совершенствуются, все же и сегодня в работе с ними встречаются большие технические трудности. Кроме того, клетки животных диплоидны и содержат намного больше генетического материала, чем бактерии, поэтому их невозможно так четко контролировать в генетическом отношении.

В отличие от системы бактерия — бактериофаг здесь имеются также технические трудности, связанные с эффективным заражением животной клетки вирусами. При работе с вирусами животных нередко происходит элюция вируса с клеток, а низкая эффективность заражения (обычно менее 0,1) означает, что более 90% физических вирусных частиц не вызывают инфекционного процесса. При множественном заражении, используемом для изучения генетических взаимодействий, все клетки получают наряду с одной или несколькими инфекционными частицами также некоторое число неинфекционных частиц.

вирусный геном

Участие последних во взаимодействии между вирусами в разных системах различно, но оно всегда затрудняет точную количественную работу. Заражение клеток вирусом гриппа с высокой множественностью ведет к феномену фон Магнуса, т. е. к образованию частиц, основная масса которых не имеет полного генома. Весьма сходные явления обнаружены сейчас и у некоторых других вирусов. В других случаях инфекция с высокой множественностью приводит к «токсическим» изменениям в клетках, которые могут подавлять проникновение вируса и, возможно, синтез вирусных макромолекул. Активный и инактивированный вирус и даже некоторые вирусные компоненты могут вызывать интерференцию и, следовательно, изменять урожай вируса (Шлезингер, 1959).

Несмотря на все эти затруднения, у полиовируса и герпесвируса было проведено генетическое картирование с помощью рекомбинационного анализа: оно технически возможно также у аденовируса и вируса осповакцины. У многих вирусов внутримолекулярная рекомбинация еще не обнаружена. Для некоторых из них надежды на успех в картировании, по-видимому, связаны с применением более прямых биохимических подходов, таких, как использование ингибиторов типа пактамицина (Рекош, 1972) и выяснение функции каждого фрагмента генома у вирусов, подобных вирусу гриппа и реовирусу (Мак-Доуэлл и др., 1972).

Введение мини-культур (Сэмбрук и др., 1966) и использование метода реплик (отпечатков) при работе с такими культурами (Робб и Мартин, 1970) должны ускорить генетическое изучение вирусов, к которым применимы эти методы. Стивенсон и сотр. (1972) сообщили об усовершенствовании обоих методов. Заслуживают дальнейшей разработки методы обогащения, например использование изатин-тиосемикарбазона (или рифампицина) для обогащения поксвирусов (Сэмбрук и др., 1966) и метод увеличения бляшек, ранее использованный для бактериофага Т4 (Эдгар и Лайлосис, 1964) и примененный для селекции ts-мутантов полиовируса (Купер и др., 1966) и реовируса (Филдс и Иоклик, 1969); эти подходы помогут ускорить селекцию ts-мутантов и повысить выход ts-мутантов по «ранним функциям».

- Вернуться в оглавление раздела "Вирусология"

Оглавление темы "Лейковирусы и реовирусы":
1. Циклы размножения лейковирусов. Начальная стадия лейковирусной инфекции
2. Транскрипция лейковирусов. Синтез ДНК на матрице лейковирусной РНК
3. Синтез и трансляция мРНК лейковирусов. Сборка и выход лейковирусов из клетки
4. Метаболизм клеток пораженных лейковирусами. Цикл размножения реовирусов
5. Транскрипция реовирусов. Этапы транскрипции реовирусов
6. Трансляция реовирусов. Репликация РНК реовирусов
7. Сборка реовирусов. Степень выражения генов реовирусов
8. Метаболизм клеток пораженных реовирусами и орбивирусами. Генетика вирусов
9. Вирусные гены. Количество генов у вируса
10. Исследование вирусного генома. Методы анализа вирусного генома