Мутанты вируса полиомы с измененным спектром хозяев. Мышиные клетки, трансформированные вирусом полиомы, обладают повышенной, но не абсолютной резистентностью к реинфекции этим вирусом, вероятно вследствие того, что при получении таких клеточных линий происходит отбор клеток, устойчивых к литическои инфекции. Поскольку такие клетки содержат интегрированный геном вируса полиомы, Бенджамин (см. обзор Бенджамина, 1972) предположил, что их можно использовать для селекции мутантов, дефектных по генам, имеющимся в интегрированном геноме.

Были выделены четыре таких мутанта, которые образовывали бляшки в клетках ЗТЗ, трансформированных вирусом полиомы, но не в нормальных клетках ЗТЗ. Это ограничение не было связано с прикреплением или раздеванием вируса, так как подобным же образом вела себя инфекционная ДНК, экстрагированная из мутантов. Все четыре мутанта утратили способность трансформировать фибробласты эмбриона крысы и клетки линии ВНК.

По-видимому, для размножения этих мутантов необходим какой-то кодируемый вирусом продукт, который образуется при участии вирусного генома, включенного в ДНК трансформированных клеток. Природа и функция этого продукта неизвестны.

Мутанты вируса везикулярного стоматита с измененным спектром хозяев. Спектр хозяев у этого вируса очень широк. Был, однако, выявлен класс мутантов (hr) с ограниченным кругом хозяев (Симпсон и Обиески, 1973а). Мутагенизированный вирус тестировали методом бляшек в смешанной индикаторной системе пермиссивных клеток куриного эмбриона и непермиссивных клеток HeLa. Среди 28 клеточных линий различного происхождения, пермиссивных для дикого типа, были найдены линии, полностью пермиссивные для hr, и линии с различной степенью рестрикции. Мутанты hr распадались на несколько фенотипических клонов.

Температурочувствительные мутанты вирусов

Современная генетика вирусов животных почти всецело основана на изучении температурочувствительных мутантов, использование которых резко возросло за последние несколько лет. Эти мутанты возникают в результате миссенс-мутаций, которые изменяют последовательность нуклеотидов в геноме вируса дикого типа таким образом, что образующийся белок неспособен принимать или сохранять надлежащую конфигурацию при рестриктивной температуре.

Обычно синтезируется полный полипептид, кодируемый мутантным геном, но функция этого полипептида дефектна при рестриктивной и нормальна или почти нормальна при пермиссивной температуре. Если дефектный белок является структурным компонентом, то вирионы, образовавшиеся при пермиссивной температуре, иногда могут быть менее термостабильными, чем вирионы дикого типа. Если же затронут не структурный белок, то вирионы обычно не отличаются по своей термостабильности от нормальных частиц. Вирусные ферменты te-мутантов, синтезированные при пермиссивных условиях, могут быть менее термостабильными, чем ферменты дикого типа [таковы, например, ДНК-полимеразы вируса осповакцины (Базилико и Йоклик, 1968) или бактериофага Т4 (де Ваард и др., 1965)]. Однако РНК-полимеразы некоторых /s-мутантов вируса леса Семлики, синтезированные при пермиссивной температуре, так же термостабильны, как и фермент дикого типа, но их синтез термочувствителен (Мартин, 1969).

Заслуживают упоминания и некоторые другие особенности температурочувствительных мутантов. Мутантные белки, будучи нефункциональными, могут не отличаться по своей иммунологической специфичности от белков дикого типа, если мутация не влияет на антигенные детерминанты или на конфигурацию белка, имеющую значение для его антигенности. Обычно это мутации типа „leaky", т. е. некоторая функциональная активность сохраняется даже при рестриктивной температуре.

Напротив, при пермиссивной температуре они обычно менее активны, чем вирус дикого типа, так как чувствительность к температуре, по-видимому, является «градуальным» параметром. В частности, поэтому может быть затруднено получение больших партий fc-мутантов с единичной мутацией: ревертанты ts+, которые обычно возникают с частотой 10-5 и выше, могут размножаться быстрее мутанта даже при пермиссивной температуре.

- Читать далее "Селекция и накопление ts-мутантов вирусов. Использование ts-мутантов вирусов"