Были выявлены следующие классы гибридных частиц: 1) частицы Ad2+HEY, которые содержат полный геном SV40, связанный с фрагментом ДНК аденовируса (тип 2), имеющим мол. вес около 13*106 (Визе и др., 1970), и дают высокий урожай инфекционного SV40; 2) частицы Ad2+LEY, которые содержат полный геном SV40, связанный с почти полным геномом аденовируса типа 2 (Визе и др., 1970), и дают урожай SV40, равный всего лишь 10-3—10-4 урожая SV40, получаемого при заражении клеток частицами Ad2 HEY (Льюис и Роу, 1970); 3) недефектные гибриды аденовирус 2—SV40.

Последняя группа гибридов содержит полный геном аденовируса, ковалентно связанный с фрагментом ДНК SV40 (Льюис и др., 1969), поэтому гибриды не образуют инфекционного SV40, но могут размножаться без дополнительных вирусов-помощников как в почечных клетках зеленой мартышки, так и в клетках из почек человеческого эмбриона. Это означает, что можно получить генетически чистый препарат гибридного вируса. Было выделено несколько таких гибридов— AdjNDj, Ad2 ND2, Ad2ND3 и т. д., но пока опубликована работа только об одном из них — Ad2ND.

Плюс означает, что частицы содержат последовательности ДНК SV40, но не образуют инфекционного потомства SV40, a ND — то, что частицы не дефектны, т. е. размножаются без помощника (Льюис и др., 1969). Как показали биофизические исследования, ДНК Ad2+NDi имеет плавучую плотность 1,715 г/мл и Тт 75,1 °С (Крампэкер и др., 1971), что почти не отличается от соответствующих показателей для ДНК аденовируса типа 2. Молекулярный вес ДНК Ad2 NDi составляет 25-106.

Результаты гибридизации с РНК SV40, синтезированной in vitro, указывали на то, что последовательности SV40 составляют, по-видимому, около 1% генома Ad2NDi (Крампэкер и др., 1971). По более точной оценке, основанной на картировании гетеродуплексов, в гибридном геноме содержится фрагмент ДНК, равный по длине 15,8% генома SV40 (Шарп, 1972). Этот небольшой фрагмент ДНК (около 800 пар оснований), способный кодировать белок с мол. весом около 25 000, должен выполнять две функции: 1) кодировать продукт, позволяющий гибриду самостоятельно размножаться в клетках ПАЗМ, и 2) кодировать специфический для SV40 U-антиген, который обнаруживается в клетках, зараженных гибридом (Льюис и Роу, 1971; Льюис и др., 1969).

В клетках, образующих гибридный вирус, обнаруживается РНК, специфичная для SV40 (Оксмен и др., 1971). Эта РНК учитывается с одного сегмента «Е»-нити генома SV40 (Сэмбрук и др., 1972b) и соответствует части «ранних» последовательностей ДНК SV40 (Оксмен и др., 1971).

Хотя мы ничего не знаем ни о механизме помощи, которую SV40 оказывает аденовирусу в клетках обезьяны, ни о механизме образования гибридов между этими вирусами, недефектные гибридные вирусы становятся все более важным инструментом для изучения молекулярной биологии SV40. Это связано с тем, что они содержат строго определенные последовательности ДНК SV40, которые используются в разнообразных экспериментах — от картирования делеционных мутантов SV40 до работ с белоксинтезирующими системами in vitro и изучения синтеза и «созревания» вирусной РНК in vivo.

По всей вероятности, в ближайшие несколько лет гибриды будут использоваться еще шире, особенно после того, как станут общедоступными и другие недефектные гибриды аденовируса типа 2, уже выделенные Льюисом.

- Читать далее "Фенотипическое смешивание вирусов. Маскирование генов вирусами"