Для измерения величины «мишени», т. е. гена, контролирующего определенную биологическую функцию, использовали последовательную инактивацию вирусов в отношении инфекционности и других биологических свойств. При обработке вируса гриппа этилениминохиноном первой исчезает способность к образованию инфекционных вирионов, далее (в указанной последовательности) способность синтезировать гемагглютинии, нейраминидазу, белок рибонуклеопротеида и белок, ингибирующий синтез клеточных макромолекул (Шолтисек и Ротт, 1964).

Трансформирующая активность вируса полиомы более устойчива к облучению, чем инфекционность (Латарже и др., 1967). С вирусами саркомы птиц были получены разнородные результаты: некоторые частицы, поврежденные радиацией, сохраняют трансформирующую способность, но не могут репродуцироваться, другие, наоборот, утрачивают первую из этих функций (Тойосима и др., 1970; Ханафуса, 1970).

Тщательное изучение рекомбинаций между ts-мутантами, проводившееся в течение ряда лет Купером, показало, что «гены» полиовируса можно разделить на две группы: 1) гены, кодирующие структурные белки вириона (NCVP1) и составляющие чуть меньше половины генома; они расположены, по-видимому, на 5'-конце молекулы РНК; 2) гены, кодирующие РНК-полимеразу I (NCVP2) и расположенные на 3'-конце (Купер, 1969; Купер и др., 1971).

Сейчас, когда появился большой набор ингибиторов белкового синтеза с известным механизмом действия, последовательность «генов» в молекулах РНК можно установить путем прямого определения очередности, в которой синтезируются белки.

Пактамицин, например, специфически подавляет инициацию белкового синтеза, но не препятствует завершению и освобождению полипептидов, синтез которых уже начался. Таким образом, если добавить после внесения пактамицина радиоактивные аминокислоты, то белки, кодируемые на 3'-концевом участке мРНК, будут помечены сильнее, чем белки, кодируемые на 5'-конце. Эметин действует иначе, «замораживая» растущий полипептид на рибосоме; поэтому добавление эметина после импульсной метки приводит к освобождению полипептидов, у которых помечен только С-концевой участок цепи и которые, следовательно, кодируются на 3'-конце молекулы мРНК.

Использовав эти два ингибитора для анализа кинетики включения метки в различные продукты расщепления полиовирусного белка-предшественника, Рекош и сотр. (1970) подтвердили правильность карты Купера; был установлен и «порядок генов» в NCVP1, который оказался (начиная от 5'-конца молекулы РНК) следующим: VP4, VP2, VP3, VP1 (Рекош, 1972). Рюккерт (1972) провел аналогичные эксперименты с вирусом энцефаломиокардита. Сравнивая включение метки в различные белки при длительной инкубации с предшественником и в опытах с вытеснением импульсной метки, он получил карту, очень сходную с картой генома полиовируса; при этом была также полностью выяснена схема расщепления белка-предшественника, которое происходит в четыре последовательных этапа.

- Читать далее "Адаптация вируса к новому хозяину. Этапы адаптации вируса"