Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Размножение вирусов в культарух клеток. Цитопатический эффект вирусов

Выбор клеточных линий, обеспечивающих оптимальный рост изучаемого вируса, имеет первостепенное значение. Некоторые вирусы размножаются практически в любой линии клеток, и, наоборот, известны клеточные линии, поддерживающие размножение вирусов самых различных типов. Вместе с тем многие вирусы способны размножаться в клетках лишь строго определенного типа, хотя в некоторых случаях с помощью повторных слепых пассажей можно адаптировать их и к другим типам.

Культуры клеток используются обычно для трех основных целей: 1) первичного выделения вируса; важнейшее значение в этом случае имеет высокая чувствительность клеточной линии и четко выраженный цитопатический эффект (ЦПЭ); 2) производства вакцин, где основным требованием является большой урожай вируса, и 3) биохимических исследований, при которых предпочтение отдают перевиваемым клеточным линиям, способным расти в суспензии. Эти же клетки, но в виде монослойных культур можно использовать для определения инфекционности; иногда для этой цели пригодны первичные культуры клеток.

Клетки, используемые для культивирования вирусов, патогенных для человека, описаны Леннетом и Шмидт (1969), а в работе Эндрюса и Перейры (1972) содержатся сведения о культурах, применяемых для всех вирусов животных. Многие исследователи работают с особыми нестандартными линиями клеток, наиболее подходящими для изучаемого ими вируса.

размножение вирусов

Цитопатический эффект вирусов

Размножение многих вирусов в культуре клеток можно обнаружить с помощью ряда биохимических методов, выявляющих внутри клетки вирусные макромолекулы или вирионы. Кроме того, существуют более грубые методы, находящие широкое применение при диагностике вирусов; некоторые из этих методов используются и в экспериментальной работе.

Цитопатический эффект (ЦПЭ). Многие, но отнюдь не все вирусы убивают клетки, в которых они размножаются, и по мере того как вновь образующиеся вирионы захватывают все большее число клеток, в клетках инфицированного монослоя постепенно накапливаются изменения, которые можно выявить с помощью гистологических методик. Эти изменения называют цитопатическими эффектами (ЦПЭ), а вызывающие их вирусы — цитопатогенными. В большинстве случаев ЦПЭ можно наблюдать в нефиксированных, неокрашенных культурах при малом увеличении микроскопа.

Так как клетки полупрозрачны, для получения большего контраста конденсор следует опустить, а ирисовую диафрагму частично закрыть. Обладая определенным опытом, можно различить несколько типов ЦПЭ в живых культурах, но для того, чтобы рассмотреть детали, например тельца включения или синцитий, необходима фиксация и окрашивание монослоя. Для распознавания вирусных антигенов в культуре клеток широко используют окрашивание флуоресцирующими антителами, описанное ниже.

ЦПЭ имеет важное значение при диагностике и выделении вирусов от больных людей или зараженных животных. Некоторые вирусы охотно размножаются в клеточных культурах при первичном выделении. Время появления первых отчетливых цитопатических изменений зависит отчасти от числа вирионов, которое содержала проба, однако в гораздо большей степени оно определяется скоростью размножения изучаемого вируса. Например, энтеровирусы и вирус простого герпеса, характеризующиеся коротким латентным периодом и дающие высокий урожай, обычно вызывают различимый ЦПЭ через 24—48 ч и полностью разрушают монослой примерно через 3 дня.

Однако цитомегаловирусы, вирус краснухи и некоторые медленно растущие аденовирусы не вызывают ЦПЭ в течение нескольких недель. Поскольку за это время культуры клеток подвергаются неспецифической дегенерации, инфицированные клетки и культуральную среду необходимо перенести на свежий монослой. После такого «слепого пассажа» часто проявляется ЦПЭ, что может быть связано с увеличением титра вируса или отбором варианта, лучше адаптированного к данной культуре клеток.

- Читать далее "Гемадсорбция вирусов. Куриные эмбрионы и лабораторные животные для роста вирусов"

Оглавление темы "Культивирование вирусов":
1. Типы культивируемых клеток. Перевиваемые клеточные линии
2. Размножение вирусов в культарух клеток. Цитопатический эффект вирусов
3. Гемадсорбция вирусов. Куриные эмбрионы и лабораторные животные для роста вирусов
4. Инфекционность вируса. Определение инфекционности методом бляшек
5. Оценка инфекционности вирусов. Методы определения инфекционности
6. Особенности квантального определения инфекционности. Статистический аспект
7. Эффективность образования бляшек. Инфекционная ДНК
8. Инфекционная РНК. Значение инфекционности вирусных нуклеиновых кислот
9. Гемаглютинация вирусов. Прямой подсчет вирусных частиц
10. Очистка вирусов. Скоростное зональное центрифугирование