Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Эффективность трансформации клеток. Свойства трансформированных клеток

Наиболее эффективно трансформация клеток паповавирусами осуществляется в системе SV40 — мышиные клетки, а частота трансформации в этой системе может достигать 40% (Тодаро и Грин, 1966а). При использовании вируса полиомы в наилучшей системе трансформируется только около 5% клеток. То обстоятельство, что трансформируются далеко не все клетки, по-видимому, не является следствием генетической неоднородности или физиологических различий между клетками в данной популяции (Макферсон и Стоукер, 1962; Блэк, 1964; Базилике и Мэрии, 1966).

Поэтому стабильная трансформация, скорее всего, есть результат случайного события, которое происходит в зараженных клетках с низкой вероятностью. Так как имеется линейная зависимость между числом трансформированных клонов и дозой вируса (Стоукер и Эйбел, 1962; Макферсон и Монтанье, 1964; Тодаро и Грин, 1966а), похоже, что трансформацию способна вызывать одна вирусная частица. Однако, чтобы преодолеть неэффективность процесса, клетки для возникновения трансформации должны быть заражены с множественностью 103—105 БОЕ на одну клетку.

Трансформацию клеток хомячка можно вызвать также при помощи ДНК вируса полиомы. Хотя трансформация может возникнуть под воздействием как сверхспирализованной, так и открытой кольцевой формы молекулы (гл. 3), сверхспира-лизованные молекулы в десять раз более эффективны (Бурго и др., 1965). Сравнение эффективности трансформации, вызываемой вирусом и выделенной 'из него ДНК, показало, что одно трансформационное событие приходится на 108—109 молекул ДНК и на 106 интактных вирионов. ДНК SV40 обладает способностью трансформировать клетки человека (Эронсон и Тодаро, 1969) и крупного рогатого скота (Дидерхолм и др., 1965).
Однако по неизвестным причинам все попытки трансформировать клетки мыши при помощи этой ДНК оказались безуспешными (Пагано и Хатчисон, 1971).

трансформация клеток

Свойства трансформированных клеток

Трансформированные клетки способны расти в условиях, ограничивающих размножение нормальных клеток. Например; трансформированные клетки делятся, будучи суспендированными в среде, содержащей агар или метилцеллюлозу (Макферсон и Монтанье, 1964); размножаются они и в среде, обедненной сывороточными факторами роста (X. Смит и др., 1971). Нетрансформированные клетки в этих условиях не делятся. Именно эти различия в регуляции деления делают возможными количественные методы определения, в основе которых лежит подсчет числа колоний трансформированных клеток на фоне нетрансформированных (см. обзор Сзмбрука и Поллака, 1972).

Наиболее распространенный метод измерения трансформации вирусом полиомы разработан Макферсоном и Монтанье (1964). Клетки заражаю; в суспензии и высевают в среду, содержащую 0,33% агара или 1,2% метилцеллюлозы. Стабильно трансформированные клетки при этих условиях растут, образуя большие колонии, видимые невооруженным глазом; нетрансформированные клетки делятся только один-два раза. Для SV40 используют другой метод, причем это отличие обусловлено главным образом историческими причинами. Монослой клеток заражают вирусом, затем разведенную суспензию клеток пересаживают либо в полную среду (Тодаро и Грин, 1964), либо в среду, обедненную сывороточными факторами роста (X. Смит и др., 1970).

В полной среде как трансформированные, так и нетрансформиро-ванные клетки формируют колонии. Колонии, образованные трансформированными клетками, толще и крупнее, они состоят из неупорядоченной массы клеток и легко отличаются от колоний, образованных нетрансформированными клетками, более тонких и более упорядоченных. В обедненной среде растут и образуют крупные колонии только трансформированные клетки. Субкультивируя трансформированные клоны, можно получить линии трансформированных клеток, полезных для изучения различий между трансформированными и нормальными клетками. Эти различия будут обсуждены в двух разделах, посвященных изменениям роста клеток и изменениям клеточной поверхности.

- Читать далее "Рост трансформированных вирусом клеток. Трансплантационные антигены"

Оглавление темы "Медленные вирусные инфекции":
1. Вирусспецифические репрессоры. Вирус полиомы
2. Обезьяний вирус. Онкогенность обезьянного вируса
3. Вирус полиомы в культуре клеток. Обезьяний вирус и клетки
4. Инфекция обезьяньего вируса. Непродуктивная инфекция вируса SV40
5. Абортивная трансформация клеток. Хромосомная вирусная патология
6. Эффективность трансформации клеток. Свойства трансформированных клеток
7. Рост трансформированных вирусом клеток. Трансплантационные антигены
8. Поверхностные антигены трансформированных клеток. Реакция с лектинами
9. Гены вирусов в трансформированных клетках. Спасение инфекционного вируса
10. Обнаружение вирусной ДНК с помощью гибридизации. Транскрипция вирусных генов