Наиболее эффективно трансформация клеток паповавирусами осуществляется в системе SV40 — мышиные клетки, а частота трансформации в этой системе может достигать 40% (Тодаро и Грин, 1966а). При использовании вируса полиомы в наилучшей системе трансформируется только около 5% клеток. То обстоятельство, что трансформируются далеко не все клетки, по-видимому, не является следствием генетической неоднородности или физиологических различий между клетками в данной популяции (Макферсон и Стоукер, 1962; Блэк, 1964; Базилике и Мэрии, 1966).

Поэтому стабильная трансформация, скорее всего, есть результат случайного события, которое происходит в зараженных клетках с низкой вероятностью. Так как имеется линейная зависимость между числом трансформированных клонов и дозой вируса (Стоукер и Эйбел, 1962; Макферсон и Монтанье, 1964; Тодаро и Грин, 1966а), похоже, что трансформацию способна вызывать одна вирусная частица. Однако, чтобы преодолеть неэффективность процесса, клетки для возникновения трансформации должны быть заражены с множественностью 103—105 БОЕ на одну клетку.

Трансформацию клеток хомячка можно вызвать также при помощи ДНК вируса полиомы. Хотя трансформация может возникнуть под воздействием как сверхспирализованной, так и открытой кольцевой формы молекулы (гл. 3), сверхспира-лизованные молекулы в десять раз более эффективны (Бурго и др., 1965). Сравнение эффективности трансформации, вызываемой вирусом и выделенной 'из него ДНК, показало, что одно трансформационное событие приходится на 108—109 молекул ДНК и на 106 интактных вирионов. ДНК SV40 обладает способностью трансформировать клетки человека (Эронсон и Тодаро, 1969) и крупного рогатого скота (Дидерхолм и др., 1965).
Однако по неизвестным причинам все попытки трансформировать клетки мыши при помощи этой ДНК оказались безуспешными (Пагано и Хатчисон, 1971).

Свойства трансформированных клеток

Трансформированные клетки способны расти в условиях, ограничивающих размножение нормальных клеток. Например; трансформированные клетки делятся, будучи суспендированными в среде, содержащей агар или метилцеллюлозу (Макферсон и Монтанье, 1964); размножаются они и в среде, обедненной сывороточными факторами роста (X. Смит и др., 1971). Нетрансформированные клетки в этих условиях не делятся. Именно эти различия в регуляции деления делают возможными количественные методы определения, в основе которых лежит подсчет числа колоний трансформированных клеток на фоне нетрансформированных (см. обзор Сзмбрука и Поллака, 1972).

Наиболее распространенный метод измерения трансформации вирусом полиомы разработан Макферсоном и Монтанье (1964). Клетки заражаю; в суспензии и высевают в среду, содержащую 0,33% агара или 1,2% метилцеллюлозы. Стабильно трансформированные клетки при этих условиях растут, образуя большие колонии, видимые невооруженным глазом; нетрансформированные клетки делятся только один-два раза. Для SV40 используют другой метод, причем это отличие обусловлено главным образом историческими причинами. Монослой клеток заражают вирусом, затем разведенную суспензию клеток пересаживают либо в полную среду (Тодаро и Грин, 1964), либо в среду, обедненную сывороточными факторами роста (X. Смит и др., 1970).

В полной среде как трансформированные, так и нетрансформиро-ванные клетки формируют колонии. Колонии, образованные трансформированными клетками, толще и крупнее, они состоят из неупорядоченной массы клеток и легко отличаются от колоний, образованных нетрансформированными клетками, более тонких и более упорядоченных. В обедненной среде растут и образуют крупные колонии только трансформированные клетки. Субкультивируя трансформированные клоны, можно получить линии трансформированных клеток, полезных для изучения различий между трансформированными и нормальными клетками. Эти различия будут обсуждены в двух разделах, посвященных изменениям роста клеток и изменениям клеточной поверхности.

- Читать далее "Рост трансформированных вирусом клеток. Трансплантационные антигены"