Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Чувствительный к температуре мутант вируса полиомы. Реверсии вирусов

Этот мутант нормально размножается в пермиссивных (мышиных) клетках, инкубируемых при 31 °С, но не способен размножаться при 38,5 °С. Получена линия хомячковых клеток, трансформированных мутантом ts-З; когда эти клетки растут при 31 °С, они проявляют все признаки клеток, трансформированных вирусом полиомы. Однако после переноса клеток в условия с температурой 38,5 °С они в тесте агглютинации лектинами ведут себя как нетрансформированные и приобретают нормальное строение (Экхарт и др., 1971).
Если изменить температуру с 38,5 °С на 31 °С, они в течение суток восстанавливают все признаки трансформации.

После роста при 38,5 °С исчезают не все свойства трансформированных клеток; например, клетки сохраняют способность формировать колонии в агаре. Эти результаты показывают, что для проявления по крайней мере некоторых фенотипических признаков трансформированных клеток требуется присутствие минимум одного продукта, закодированного в геноме вируса.

Данные о наличии в трансформированных клетках вирус-специфических репрессоров противоречивы. С одной стороны, Дженсен и Копровский (1969) полагают, что некоторые линии пермиссивных клеток, трансформированные SV40, не содержат репрессора, так как полностью чувствительны к суперинфекции (Барбанти-Бродано и др., 1970). К подобному же заключению пришел Базилико (1971; Базилико и Ванг, 1971), изучавший клетки, трансформированные вирусом полиомы; оказалось, что гибриды клеток ВНК, трансформированных вирусом полиомы, и мышиных клеток ЗТЗ чувствительны к суперинфекции.

вирус полиомы

С другой стороны, Кассинджена и сотр. (1969а; Суарес и др., 1971) выделили из ряда клеток, трансформированных SV40, белок, обладавший, по-видимому, некоторыми свойствами, которых можно было бы ожидать у вирусного репрессора. Это вещество специфически подавляло образование бляшек вирусом SV40 на монослое клеток почки обезьяны. Однако максимальное уменьшение числа бляшек, достигнутое группой Кассинджены, составило около 50%, что вряд ли достаточно для серьезного обсуждения.

Реверсии вирусов

В линиях трансформированных клеток изредка возникают ревертанты, у которых восстанавливается нормальный фенотип; для отбора этих вариантов разработано несколько остроумных приемов. Например, Поллак и сотр. (1968) использовали 5-фтордезоксиуридин, который приводил к избирательной гибели делящихся клеток в плотных культурах мышиных клеток, трансформированных SV40. Выжившие клетки имели уплощенное строение нетрансформированных клеток, дорастали в культуре до низкой плотности насыщения, были менее онкогенными, чем родительская линия (Поллак и Тибор, 1969) и обладали сниженной способностью агглютинироваться лектинами (Поллак и Бургер, 1969).

Уайк (1971 а), чтобы убить подавляющее большинство трансформированных вирусом полиомы клеток ВНК-21, которые синтезируют ДНК при росте в агаре, применял 5-бромдезоксиуридин; в результате были получены клетки, которые, подобно нетрансформированным клеткам ВНК, не росли в суспензии. В опытах Озанн и Сэмбрука (1971b), использовавших конканавалин А, погибало 99,99% мышиных клеток, трансформированных SV40; выжившие клетки формировали «плоские» колонии и в меньшей степени агглютинировались лектинами, чем клетки исходной трансформированной линии.

Хотя ревертанты Поллака и Озанн приобретали фенотип, который во многих отношениях был характерен для нетрансформированных клеток, содержание вирусных последовательностей в их ДНК, судя по кинетике реассоциации, не изменялось. Более того, в них обнаруживалась вирусная РНК и синтезировался вирус-специфический Т-антиген (Озанн и др., 1973). Однако опыты по спасению инфекционного SV40 путем слияния ревертантов с пермиссивными клетками не давали стабильных результатов. Вначале Поллак (1970) сообщил, что вирус, выделенный из ревертантов, обладает как инфекционной, так и трансформирующей активностью.

Однако по мере длительного культивирования ревертантов становилось все труднее выделить из них вирус. Причина этого явления и механизм реверсии остаются неизвестными. Мы не знаем точно, связан ли этот процесс с мутациями и происходят ли они в вирусных или клеточных генах. С другой стороны, Рейтер и Базилико (1972) недавно получили линию обработанных SV40 мышиных клеток, которые при низкой температуре имели трансформированный фенотип, а фенотип клеток при повышенной температуре приближался к нормальному. Из этих клеток можно было выделить SV40, который во всех отношениях соответствовал вирусу дикого типа. Следовательно, в этом случае способность к реверсии была обусловлена мутацией, происходящей в клеточных, а не в вирусных генах. Существование этой линии показывает, что для поддержания клетки в трансформированном состоянии требуется постоянное функционирование по крайней мере одного клеточного гена.

- Читать далее "Выделение вирусов ревертантов. Гибриды аденовируса SV40"

Оглавление темы "Онкогенные РНК вирусы":
1. Вирус-специфические белки в трансформированных клетках. Мутанты вируса полиомы
2. Чувствительный к температуре мутант вируса полиомы. Реверсии вирусов
3. Выделение вирусов ревертантов. Гибриды аденовируса SV40
4. Онкогенные РНК вирусы. Классификация онкогенных РНК вирусов
5. Опухолевые РНК вирусы кур. Лейкозы птиц
6. Саркома Рауса. Возбудитель саркомы рауса
7. Развитие саркомы Рауса у млекопитающих. Диагностика причины саркомы Рауса
8. Воздействие опухолевых вирусов РНК на клетку. Титрование вирусов в культуре
9. Штамм Брайен вируса саркомы Рауса. Псевдотипы вируса саркомы Рауса
10. Спектр хозяев вируса саркомы Рауса. КОФАЛ-тест