Помимо вышеописанных методов, для выделения ревертантов были использованы и другие приемы. Например, из; трансформированных вирусом полиомы клеток хомячка были выделены варианты, способные расти на монослое нормальных клеток, фиксированных глутаральдегидом. Неясно, почему эта процедура приводит к отбору ревертантов или индуцирует их образование; однако около 90% клонов, которые были селекционированы этим методом, оказались менее онкогенными, чем родительские клетки, и вели себя in vitro подобно нормальным клеткам. Ревертанты, судя по всему, сохраняют гены вируса полиомы, так как как они содержат вирус-специфический Т-антиген. В противоположность этому ревертанты, выделенные Мэрии и Литлфилд (1968), Мэрии и Макферсоном (1969) и Мэрии (1971), по-видимому, утеряли вирусные гены. Так как такие ревертанты были получены в результате утраты трансформированными клетками части хромосом, кажется вероятным, что некоторые из утраченных хромосом содержали вирусные гены, ответственные за трансформацию.

Фенотип ревертантов в основном идентичен фенотипу нетрансформированных клеток, поэтому оказалось, что ревертанты могут быть использованы для определения трансформирующей активности вируса. Однако из всех доступных типов ревертантов только те, которые были получены Мэрии и Литлфилд, оказались способными к повторной трансформации.

Причины резистентности ревертантов, полученных Уайком, Поллаком и Озанн, не выяснены. Можно привлечь много толкований — от относительно тривиальных (клетки резистентны к суперинфекции в связи с изменением клеточной поверхности) до более глубоких и интересных (место включения генома суперинфицирующего вируса блокировано первым геномом, в клетке присутствуют репрессоры, имеют место трансдоминантные эффекты и т. д.). В настоящий момент мы не знаем, какое из этих объяснений правильно, и не можем исключить другие, неизвестные нам причины.

Если существует механизм, который препятствует повторной трансформации, он должен быть направлен специфически против исходного трансформирующего вируса; об этом говорит неоднократно доказанная возможность последовательной трансформации клеток мыши или хомячка вирусом полиомы и SV40 (Тодаро и др., 1965; Такамото и Хэбел, 1966). Такие клетки содержат Т-антигены и трасплантационные антигены обоих вирусов, а гибридизационные эксперименты выявили в них два вирусных генома (Бенджамин, 1966; Вестфаль и Дульбекко, 1968; Гельб и др., 1971b). Эти результаты позволяют предположить, что ДНК SV40 и вируса полиомы встраиваются в разные участки клеточного генома.

Гибриды аденовируса SV40

Свойства гибридных вирусов, содержащих ковалентно связанные последовательности ДНК аденовируса и SV40 в аденовирусных капсидах. Популяция аденовирусов, содержащая такие частицы (Е46+), вызывает у хомячков опухоли, в которых обнаруживаются Т-антигены как SV40, так и аденовируса типа 7 (Хюбнер и др., 1964). После трансформации in vitro во всех трансформированных клетках был найден Т-антиген SV40, тогда как Т-антиген аденовируса типа 7 отсутствовал (Блэк и Тодаро, 1965); эпендимомы, развившиеся в результате внутримозгового введения новорожденным хомячкам смешанного препарата аденовирус — SV40, были по .морфологическим показателям идентичны эпендимомам, вызванным одним SV40 (Киршстайн и др., 1965). Изучение трансплантационного иммунитета показало, что резистентность, развивающаяся после введения смешанных вирионов, сравнима с той, которая (появляется под влиянием одного SV40 (Рапп и др., 1966).

SV40-компонент подобным же образом доминирует при трансформации и индукции опухолей некоторыми препаратами гибрида аденовирус типа 2 — SV40; в трансформированных in vitro клетках хомячка морфология, хромосомные аберрации и Т-антиген соответствовали аналогичным признакам, выявляемым после трансформации одним SV40 (Блзк и Уайт, 1967; Айгел и Блэк, 1967). Аденовирус типа 2 неонкогенен; однако опухоли, сформировавшиеся у хомячков после введения им клеток, трансформированных дефектными гибридами аденовирус-2 — SV40, содержали поля, гистологически подобные аденовирусным опухолям, а в сыворотках хомячков с такими опухолями присутствовали антитела к некоторым ранним антигенам аденовируса. Наиболее изученный из недефектных гибридных вирусов, выделенный из такой популяции вирионов Льюисом и сотр. (Ad2 ND1) и содержащий ДНК SV40 в количестве, достаточном для кодирования белка с молекулярным весом лишь 25 000, оказался для новорожденных хомячков неонкогенным (Льюис, 1969).

- Читать далее "Онкогенные РНК вирусы. Классификация онкогенных РНК вирусов"