Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Воздействие опухолевых вирусов РНК на клетку. Титрование вирусов в культуре

Обычно в результате заражения клеток неонкогенными вирусами образуются новые вирусные частицы, а клетка гибнет. В клетках, трансформированных онкогенными вирусами, мы сталкиваемся с взаимодействием другого типа. В случае ДНК-вирусов нарушается регуляция деления клеток, и они инфекционный вирус не образуют. Однако у онкогенных РНК-вирусов нет такого четкого различия между продуктивной инфекцией и трансформацией. Зараженные клетки не погибают, но станут ли они трансформированными, будут вырабатывать вирус или произойдут оба процесса, зависит от взаимодействия многих переменных, в том числе от генотипа и фенотипа клетки и вируса.

Взаимодействие между клеткой и опухолеродным РНК вирусом осуществляется по одному из следующих четырех типов: 1) клепка резистентна к заражению — не происходит ни репродукции вируса, ни трансформации клетки; 2) вирус размножается в клетке, но не трансформирует ее; 3) вирус размножается в клетке и трансформирует ее; 4) клетка трансформируется, но вирус не размножается.

Поскольку заражение клетки опухолеродными РНК-вирусами имеет различные последствия, предложено несколько типов титрования этих вирусов in vitro. Для титрования вирусов сарком птиц наиболее широко используют метод образования фокусов трансформации в культуре фибробластов куриного эмбриона. Эта методика впервые была предложена Хальберштедтером и др. (1941), затем улучшена Мэнекером и Группе (1956) и окончательно усовершенствована Темином и Рубином (1958).

титрование вирусов

Препарат вирусов последовательно разводят и заражают им клетки. Через несколько дней некоторые из них трансформируются, и формируются «очаги», или «фокусы»; происходящие при этом изменения морфологии и ростовых свойств трансформированных клеток подобны тем, которые уже описаны при рассмотрении онкогенных ДНК-вирусов. Число вирусных частиц прямо пропорционально числу фокусобразующих единиц. В отличие от вирусов сарком большинство штаммов вируса лейкоза птиц не трансформирует фибробласты, и при заражении ими, как правило, не бывает видимых признаков инфекции.

Лейковирусы обычно титруют с помощью серологических методов, которыми определяют вирус-специфические антигены в зараженных клетках (Фогт и Рубин, 1963), или по интерференции. Титрование по интерференции основано на том, что в клетках, зараженных вирусами лейкоза, суперинфицирующий вирус саркомы, если он принадлежит к той же антигенной подгруппе, что и вирус лейкоза, не размножается; уменьшение титра вируса саркомы используется для оценки количества вируса лейкоза, присутствующего в исследуемом препарате (Рубин, 1960).

Оба эти метода титрования довольно трудоемки, и для некоторых вирусов лейкоза птиц будут, вероятно, заменены новым, более простым (Каваи и Ханафуса, 1972), который заключается в следующем. Культуры куриных фибробластов заражают температурочувствительным мутантом ВСР и инкубируют при 41 °С. В этих условиях трансформации не происходит. Если такие культуры суперинфицировать вирусами лейкоза птиц антигенных подгрупп В или D, то через 7 дней инкубации при 41 °С образуются бляшки. Механизм этого явления непонятен. Неясно, почему вирусы лейкоза подгрупп А, С и Е не вызывают образования бляшек.
Тем не менее этот метод позволяет титровать инфекциониость лейковируса проще, быстрее и точнее, чем прежние методы.

Хотя вирусы лейкоза обычно называют нетрансформирующими, некоторые «х штаммы вызывают морфологические изменения культивируемых клеток (Балуда и Гётц, 1961; Московичи и др., 1969; Калнек, 1964; Болоньези и др., 1968) и могут трансформировать не фибро,бласты, а клетки других типов, например кроветворные клетки (Ханафуса, 1970). По-видимому, способность вируса трансформировать клетку зависит от степени ее дифференцирован. Неизвестно, почему одни опухолеродные вирусы птиц трансформируют куриные фибробласты, а другие не трансформируют. Дыосберг и сотрудники (Дьюсберг и Фогт, 1970; Дыосберг и др., 1971; Мартин и Дьюсберг, 1972) показали, что нетрансформирующие (лейкозные) вирусы содержат меньше РНК, чем вирусы сарком, и лишены специфической субъединицы РНК.

Кроме того, Фогт (1971а) получил данные о том, что нетрансформирующие вирусы спонтанно выщепляются при размножении вирусов сарком; вероятно, это происходит в результате случайной утраты субъединицы генома вируса саркомы, ответственной за трансформацию. Однако для подтверждения этой гипотезы требуются дальнейшие исследования.

- Читать далее "Штамм Брайен вируса саркомы Рауса. Псевдотипы вируса саркомы Рауса"

Оглавление темы "Онкогенные РНК вирусы":
1. Вирус-специфические белки в трансформированных клетках. Мутанты вируса полиомы
2. Чувствительный к температуре мутант вируса полиомы. Реверсии вирусов
3. Выделение вирусов ревертантов. Гибриды аденовируса SV40
4. Онкогенные РНК вирусы. Классификация онкогенных РНК вирусов
5. Опухолевые РНК вирусы кур. Лейкозы птиц
6. Саркома Рауса. Возбудитель саркомы рауса
7. Развитие саркомы Рауса у млекопитающих. Диагностика причины саркомы Рауса
8. Воздействие опухолевых вирусов РНК на клетку. Титрование вирусов в культуре
9. Штамм Брайен вируса саркомы Рауса. Псевдотипы вируса саркомы Рауса
10. Спектр хозяев вируса саркомы Рауса. КОФАЛ-тест