Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Оценка инфекционности вирусов. Методы определения инфекционности

Метод инфекционных центров. Метод инфекционных центров представляет собой важную модификацию метода бляшек. Суспензию клеток заражают вирусом и до того, как образовались новые вирионы, т. е. во время латентного периода, помещают на монослой клеток, который затем осторожно покрывают агаром. Число появляющихся бляшек соответствует числу первоначально зараженных клеток. С помощью простых расчетов можно определить долю инфицированных клеток в исследуемой суспензии.

Число зараженных клеток в суспензии или монослое можно также определить через несколько часов после заражения культуры методом иммунофлуоресценции или в соответствующих случаях гемадсорбции (Уайт и др., 1962).

Метод трансформации. Для количественного определения инфекционности вирусов, не вызывающих гибели клеток, были предложены методы, отличные от метода бляшек. Мы уже упоминали об использовании методов гемадсорбции и интерференции. Кроме того, существует ряд онкогенных вирусов, которые могут вызывать лизис клеток в культуре одного вида, но «трансформировать» другие типы клеток. Такие клетки не погибают, но их поведение в культуре приобретает многие черты, свойственные злокачественным клеткам.

инфекционность вирусов

По сравнению с незараженными у трансформированных клеток в меньшей степени выражено контактное торможение, что приводит к неограниченному их росту и образованию выступающих над монослоем «микроопухолей», легко различимых на фоне нормальных клеток. Подобно злокачественным клеткам, полученным непосредственно из опухоли, трансформированные клетки приобретают способность расти в полужидкой суспензии агара или метилцеллюлозы. Для ряда онкогенных вирусов, например для вируса саркомы Рауса, трансформация является основным методом определения инфекционности; инфекционность других вирусов, менее эффективно трансформирующих клетки (например, ДНК-содержащие вирусы), обычно определяют иными методами.

Метод «оспин». К числу наиболее старых методов, иногда еще применяющихся для поксвирусов, следует отнести титрование на хорионе куриного эмбриона. Вновь синтезированный вирус, освобождаясь из зараженных клеток, заражает главным образом соседние клетки; таким образом, каждая инфекционная частица в конечном итоге вызывает локальное повреждение клеток, именуемое «оспиной». Вид оспин часто характерен для определенной группы вирусов или даже для определенного мутанта (Джеммелл и Феннер, 1960).

Квантальный тип определения инфекционности не является количественным, т. е. с его помощью мы не можем подсчитать число инфекционных частиц, содержащихся в инокуляте, а можем лишь показать, есть ли они там вообще. Поскольку в основе квантального определения лежит принцип «все или ничего», оно далеко не столь точно, как количественное, в связи с чем применяется только для вирусов, не образующих бляшек. Серийные разведения вируса вводят параллельно в несколько культур клеток, эмбрионов или животных.

Затем каждый из этих объектов выдерживают в течение определенного времени, необходимого для того, чтобы вирус размножился и распространился, вызывая соответствующий эффект: разрушение всей культуры или гибель животного. Таким образом, каждый хозяин дает информацию лишь о том, был или не был он заражен данным разведением вируса. Для некоторых вирусов, таких, например, как вирус осповакцины, способных вызывать местные повреждения кожи животных (кролика), можно применять более экономичные методы. Материал вводят в 20—30 отдельных участков кожи, каждый из которых дает ответ «все или ничего», равноценный гибели или выживанию культуры клеток или мыши. Хорошим примером точного квантального анализа служит определение инфекционности вируса гриппа титрованием на квадратиках скорлупы с аллантоисной мембраной с последующим учетом результатов методом гемагглютипации (Фазекаш де Сен-Грот и Уайт, 1958).

- Читать далее "Особенности квантального определения инфекционности. Статистический аспект"

Оглавление темы "Культивирование вирусов":
1. Типы культивируемых клеток. Перевиваемые клеточные линии
2. Размножение вирусов в культарух клеток. Цитопатический эффект вирусов
3. Гемадсорбция вирусов. Куриные эмбрионы и лабораторные животные для роста вирусов
4. Инфекционность вируса. Определение инфекционности методом бляшек
5. Оценка инфекционности вирусов. Методы определения инфекционности
6. Особенности квантального определения инфекционности. Статистический аспект
7. Эффективность образования бляшек. Инфекционная ДНК
8. Инфекционная РНК. Значение инфекционности вирусных нуклеиновых кислот
9. Гемаглютинация вирусов. Прямой подсчет вирусных частиц
10. Очистка вирусов. Скоростное зональное центрифугирование