Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Гемаглютинация вирусов. Прямой подсчет вирусных частиц

Внешняя оболочка многих вирусов содержит вирус-специфические белки, способные присоединяться к эритроцитам.
Такие вирусы могут образовывать мостики между эритроцитами, формируя при этом трехмерную решетку. Это явление, известное под названием гемагглютинации, было впервые описано Хёрстом (1941), который затем подробно изучил механизм гемагглютинации, вызываемой вирусом гриппа. Гемагглютинирующии белок (гемагглютинин) вируса гриппа представляет собой гликопротеид, образующий на поверхности вириона многочисленные короткие выступы.

Вирус может прикрепляться к эритроцитам любого вида, обладающим комплементарными рецепторами — различными гликопротеидами. Гемагглютинация, вызываемая вирусом гриппа и парамиксовирусами, а не какими-либо другими, осложняется тем, что вирионы содержат также фермент нейраминидазу, разрушающую гликопротеидные рецепторы на поверхности эритроцитов, что приводит к элюции вируса. Если реакцию проводить при +4°С (температуре, слишком низкой для действия фермента), то элюции не происходит.

Для макроскопической агглютинации куриных эритроцитов (обычно 0,25 мл 1%-ной суспензии) требуется около 107 вирионов вируса гриппа. Следовательно, реакция гемагглютинации не настолько чувствительна, чтобы уловить небольшие количества вируса, однако она весьма проста, что делает ее удобной при наличии больших количеств вируса. В лунках пластмассовой пластины с помощью откалиброванной проволочной петли готовят последовательные (обычно двукратные) разведения вирусной суспензии, а затем в каждую лунку добавляют эритроциты. Неагглютинированные эритроциты оседают, образуя своеобразную «пуговицу», тогда как агглютинированные клетки образуют зонтик.

гемаглютинация вирусов

Техника негативного контрастирования настолько проста, что нередко число вирусных частиц в относительно грубой суспензии можно непосредственно подсчитывать с помощью электронного микроскопа. Вирус можно смешать с суспензией частиц латекса известной концентрации, что позволит относительно легко определить концентрацию вируса. Альтернативная процедура заключается в том, что вирионы, содержащиеся в известном объеме, осаждают в ультрацентрифуге прямо на сеточки для электронной микроскопии.

Расширение наших знаний в области биологии вирусов животных в значительной мере явилось результатом разработки трех новых экспериментальных подходов: во-первых, культивирование in vitro разнообразных типов клеток животных, что в свою очередь обеспечило получение больших количеств многих вирусов животных; во-вторых, в результате развития физических методов разделения макромолекул были разработаны методики, позволяющие очистить до гомогенного состояния большие количества различных вирусов и их компонентов; в-третьих, доступность радиоактивных соединений-предшественников с высокой удельной радиоактивностью позволила изучить детали биохимических процессов, происходящих как в нормальной, так и в зараженной вирусом клетке.

Сочетание этих трех подходов способствовало широкому распространению многих методов, которые всего несколько лет назад имели лишь узкое применение или вообще были недоступны.

- Читать далее "Очистка вирусов. Скоростное зональное центрифугирование"

Оглавление темы "Культивирование вирусов":
1. Типы культивируемых клеток. Перевиваемые клеточные линии
2. Размножение вирусов в культарух клеток. Цитопатический эффект вирусов
3. Гемадсорбция вирусов. Куриные эмбрионы и лабораторные животные для роста вирусов
4. Инфекционность вируса. Определение инфекционности методом бляшек
5. Оценка инфекционности вирусов. Методы определения инфекционности
6. Особенности квантального определения инфекционности. Статистический аспект
7. Эффективность образования бляшек. Инфекционная ДНК
8. Инфекционная РНК. Значение инфекционности вирусных нуклеиновых кислот
9. Гемаглютинация вирусов. Прямой подсчет вирусных частиц
10. Очистка вирусов. Скоростное зональное центрифугирование