В некоторых случаях можно определить принадлежность индивидуального вирусного полипептида к той или иной морфологической субъединице вирусной частицы. В зависимости от того, какой вирус исследуется, методику определения модифицируют соответствующим образом, однако принцип метода остается одним и тем же — вирусные частицы мягко дезинтегрируют на морфологические субъединицы, обычно обработкой детергентами или разбавленными растворами щелочей, затем полученные субъединицы разделяют с помощью иммунопреципитации, скоростного центрифугирования или изопикнического градиентного центрифугирования.

Последующие процедуры весьма несложны. Фракцию, содержащую субъединицы, нагревают в присутствии додецилсульфата натрия и меркаптоэтанола, в результате чего эти субъединицы диссоциируют на составляющие их полипептиды, а затем методом электрофореза в полиакриламидном геле определяют точный состав субъединиц, т. е. какие виды полипептидных цепей и в каком количестве входят в состав субъединицы. Метод не может считаться универсальным, поскольку результаты зависят от успешной дезинтеграции вириона и разделения морфологически идентифицируемых субъединиц; однако в наиболее удачных случаях, как, например, в работе с вирусом энцефаломиокардита, этот метод позволяет изящно и достоверно продемонстрировать корреляцию между химическими и морфологическими субъединицами.

Для тех вирусов, у которых принадлежность полипептидов к субъединицам определена не полностью или вообще не определена, положение индивидуальных полипептидов в вирусной частице можно определить путем иодирования радиоактивным изотопом 125I внешних белков вириона в присутствии лактопероксидазы (Стэнли и Хэслем, 1971) или с помощью антител, меченных ферритином или пероксидазой хрена, с последующей радиоавтографией.

Оболочки и ферменты вирусов

Все вирусы содержат нуклеиновые кислоты и белки, причем многие построены только из этих компонентов. Другие вирусы, кроме того, содержат также липиды и углеводы. У всех вирусов, за исключением поксвирусов, занимающих особое положение, липиды и углеводы локализуются во внешней оболочке, окружающей геном и связанные с ним белки. Вирусы с такой структурой иногда называют суперкапсидными. Наличие или отсутствие у вируса липопротеидной оболочки можно легко и безошибочно обнаружить с помощью электронного микроскопа. Ранее использовались косвенные методы, такие, как определение чувствительности вируса к жирорастворителям, например эфиру или дезоксихолату, или мечение радиоактивными сахарами (фукозой или глюкозамином), которые преимущественно включаются в мембранные гликопротеиды.

Нейраминидаза как липопротеидный компонент оболочки миксовирусов обнаружена много лет назад. Еще более важным было открытие в составе многих вирусов полимераз нуклеиновых кислот. Как выяснилось, с вирусами различных групп ассоциировано три типа полимераз: ДНК-зависимая РНК-полимераза, РНК-зависимая ДНК-полимераза и РНК-зависимая РНК-полимераза. Наличие этих полимераз можно легко определить по включению соответствующих меченых предшественников в нуклеиновые кислоты в присутствии вирусных частиц. В некоторых случаях активность обнаруживается при использовании целой вирусной частицы, однако обычно необходимо частично «раздеть» вирионы, удалив с помощью детергентов или протеолитических ферментов их липопротеидные или белковые оболочки.

Описаны и другие ферменты, связанные с вирионами более сложных вирусов. Очень важно отличать ферменты, которые адсорбировались на внешней поверхности частицы, от ферментов, являющихся составной частью вириона. Если ферменты и в самом деле входят в состав вириона, важно установить их локализацию, т. е. определить, находятся ли они в наружной липопротеидной оболочке, во внешней части капсида или внутри сердцевины вируса.

- Читать далее "Антитела и антигены вирусов. Нейтрализация вирусов"