В эпидемиологии широко используется серологическое обследование популяции позвоночных, которое позволяет нам судить о распределении и распространении вирусов во времени и пространстве. В диагностической вирусологии идентификацию неизвестных вирусов, выделенных от больных или здоровых особей, проводят одним или несколькими перечисленными ниже методами с использованием антител известной специфичности. Выделить вирус часто не удается, но возрастание титра антител к определенному вирусу в сыворотке при переходе от острого периода болезни к выздоровлению может служить предварительным доказательством этиологической роли тестируемого вируса.

В исследовательской работе серологические методы позволяют обнаружить различные антигенные компоненты вируса как в зараженной клетке, так и в процессе очистки, а также измерить концентрацию этих антигенов. Для подобных целей используют антисыворотки против вирусных антигенов, полученные от лабораторных животных, чаще всего от кроликов. Кроме того, образование антител играет важную роль в патогенезе вирусных заболеваний, и методы определения различных видов антител в различных органах и жидкостях организма необходимы для более глубокого понимания процессов, связанных с заболеванием интактных животных.
Существует много серологических методов исследования. Выбор метода определяется конкретными целями исследования.

Нейтрализация вирусов

Как известно, некоторые антитела, взаимодействуя с вирионами, нейтрализуют их инфекционность. Реакцию нейтрализации обычно проводят следующим образом. Сыворотку прогревают в течение 30 мин при 56 °С, чтобы разрушить неспецифические ингибиторы вирусной инфекционное™. Затем различные разведения сыворотки смешивают с одной и той же дозой вируса, скажем 100 ИДбо, выявляемых в культуре ткани. Смесь оставляют на некоторое время, например на 60 мин, при комнатной температуре, а затем определяют остаточную инфекционность, используя культуры ткани, куриных эмбрионов или лабораторных животных. За конечную точку титрования принимают наибольшее разведение антисыворотки, подавляющее развитие ЦПЭ в культуре клеток или размножение вируса в организме животного.

Взаимодействие вирионов с антителами до некоторой степени обратимо, поэтому на определяемый титр антисыворотки будут оказывать влияние такие факторы, как время и температура инкубации смеси вирус—антисыворотка, объем жидкости, в котором ставится реакция, чувствительность используемого типа клеток и время регистрации ЦПЭ. Поскольку все эти факторы могут влиять на конечное равновесие между связанными и свободными антителами, прямое сравнение титров имеет смысл лишь для сывороток, исследованных в одной лаборатории, и при использовании стандартной методики. Например, все пробы должны быть учтены, как только в контроле — «только вирус» (без антисыворотки)—выявляется полный ЦПЭ; в противном случае определяемый нейтрализующий титр сыворотки будет тем ниже, чем позже учитывается реакция, так как вирус «прорывается» через высокие разведения антисыворотки.

Существует много других способов постановки реакции нейтрализации вирусов. Наиболее важным считают тест на уменьшение числа бляшек, образуемых данной вирусной суспензией в присутствии последовательных разведений антител.

Реакция нейтрализации вирусов является наиболее чувствительной и специфичной из всех известных серологических реакций. Эта реакция регистрирует лишь антитела к поверхностным антигенам, особенно к антигенам, участвующим в адсорбции вируса на клетке-хозяине. Именно эти поверхностные антигены представляют собой материал, наиболее подверженный давлению отбора в процессе эволюции (посредством, например, антигенного дрейфа) и, следовательно, специфичный для вирусного типа или штамма. Поэтому нейтрализующие антитела против данного серотипа обычно не дают или дают небольшую перекрестную реакцию с другими вирусами в пределах одной и той же группы.

- Читать далее "Торможение гемаглютинации вирусов. Выявление вирусов диффузией в геле"