Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Связывание комплемента для выявления вирусов. Техника связывания комплемента

Комплексы антиген—антитело, в том числе комплекс вирус—антитело, способны «связывать» комплемент. Действительно, после присоединения антител к вирусам с липопротеидной оболочкой фосфолипаза, являющаяся неотъемлемым компонентом системы комплемента, может повреждать оболочку вируса.

Для постановки реакции связывания комплемента (РСК) готовят сыворотки от больных в острой фазе и от выздоравливающих. Чтобы инактивировать комплемент, сыворотки прогревают при 56 °С в течение 30 мин, а затем готовят серию разведений. Обычно для экономии реагентов используют небольшие пластмассовые пластины. К каждому разведению сыворотки добавляют по две единицы антигена (например, неочищенного препарата живого или инактивированного вируса) и по две единицы комплемента из сыворотки морской свинки.

Реагенты оставляют на ночь при 4°С (или при комнатной температуре на более короткое время) для связывания комплемента. Затем к пробам добавляют бараньи эритроциты, сенсибилизированные добавлением кроличьей антисыворотки против них («гемолизин»), и инкубируют 45 мин при 37 °С. В тех лунках, где комплемент связан комплексом вирус— антитело, гемолизин агглютинирует эритроциты, но не вызывает их лизиса; там, где комплемент свободен, происходит лизис.
Для того чтобы уверенно интерпретировать результаты реакции, необходимо поставить ряд контролен, исключающих перечисленные ниже возможности.

1. Сыворотка может быть антикомплементарна, т. е. связывать комплемент даже в отсутствие вирусного антигена. Чаще всего это вызывается гемолизом или бактериальным загрязнением сыворотки вследствие ее неправильного получения или хранения или высоким содержанием липидов в сыворотке, взятой вскоре после приема больным жирной пищи. Антикомплементарную активность можно иногда удалить нагреванием, адсорбцией на каолине или адсорбцией на избытке комплемента с последующим прогреванием.

комплемент и вирусы

2. Антикомплементарен может быть препарат вирусного антигена, т. е. он может связывать комплемент даже в отсутствие антивирусной сыворотки, однако это встречается довольно редко. Исключение составляют экстракты из мозга мышей, используемые при изучении тогавирусов. Липиды, обусловливающие антикомплементарность вирусного антигена, можно удалить ацетоном или фреоном.

3. Препарат вирусного антигена может связывать комплемент «неспецифически» в результате взаимодействия в сыворотке клеточных антигенов с антиклеточными антителами сыворотки. Преодолеть затруднение такого рода можно, разумно подбирая соответствующих хозяев для размножения вируса и получения антисыворотки.

4. Отметим, что антикомплементарная активность сыворотки может указывать на присутствие в крови иммунного комплекса, способного связывать комплемент in vivo. Поскольку такой комплекс антиген—антитело, вероятно, играет важную роль в патогенезе, его присутствие необходимо дифференцировать от присутствия неспецифической антикомплементарной активности упомянутых выше типов.

Грубые препараты вируса (например, культуральная среда), обычно используемые в качестве антигена в РСК, кроме вирионов, содержат «растворимые» антигены, соответствующие не собранным компонентам вириона, а также вирус-специфическим белкам, не входящим в состав вириона. Антитела ко всем этим антигенам могут содержаться в сыворотке выздоравливающих, где они обнаруживаются с помощью РСК. Поэтому при обычной постановке РСК будет наблюдаться перекрест между серотипами данной группы вирусов в том случае, если эти серотипы обладают общими групповыми антигенами (например, аденовирусы).

С этой точки зрения РСК не является высоеоспецифической реакцией, так как она не всегда позволяет различить антитела к разным серотипам. Реакция также не слишком чувствительна: титр антител, определенный с помощью РСК, ниже титра антител, определенного в той же самой сыворотке методами нейтрализации или торможения гемагглютинации. Однако если исследователь имеет слабое представление даже о групповой принадлежности вируса, то РСК следует признать наиболее удобным тестом для предварительной проверки сыворотки на наличие определенных антител.

Например, одна РСК, в которой в качестве антигена использован любой серотип аденовируса, выявит сывороточные антитела, вызванные любым другим аденовирусным серотипом. После такого определения «группоспецифических» антител можно использовать реакции нейтрализации или ТГ и идентифицировать «типоспецифические» антитела, если в этом будет необходимость.

- Читать далее "Иммунофлуоресценция вирусов. Виды иммунофлуоресценции вирусов"

Оглавление темы "Выявление вирусов":
1. Критерии чистоты вирусных препаратов. Радиоактивные изотопы в изучении вирусов
2. Электронная микроскопия вирусов. Гибридизация вирусов
3. Гибридизация ДНК вирусов. Нуклеиновые кислоты вирусов
4. Диагностика вирусных нуклеиновых кислот. Белки вирусов
5. Белковый состав морфологических субъединиц вирусов. Оболочки и ферменты вирусов
6. Антитела и антигены вирусов. Нейтрализация вирусов
7. Торможение гемаглютинации вирусов. Выявление вирусов диффузией в геле
8. Связывание комплемента для выявления вирусов. Техника связывания комплемента
9. Иммунофлуоресценция вирусов. Виды иммунофлуоресценции вирусов
10. Радиоиммунологические методы выявления вирусов. Техника радиоиммунных методов