Советуем для ознакомления:
Сколько стоит детская нейропсихологическая диагностика в Москве?

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Иммунофлуоресценция вирусов. Виды иммунофлуоресценции вирусов

Свыше 30 лет назад Куне ввел в вирусологию метод, который оказался чрезвычайно полезным и в исследовательской работе, а в настоящее время широко используется и в диагностических целях. «Флуоресцирующие антитела» представляют собой специфические иммуноглобулины, «помеченные» красителем типа флуоресцеина или родамина, флуоресцирующим при облучении ультрафиолетовым или синим светом.

Связывание (конъюгацию) красителя и белка можно достаточно легко осуществить в лаборатории с помощью стандартной методики; препараты иммуноглобулинов, коиъюгированных с флуоресцеином, поступают также в продажу. Существует три основных варианта этой методики.

Прямая иммунофлуоресценция (А—аф). Вирусный антиген (А) (в виде, например, фиксированного ацетоном зараженного вирусом монослоя клеток на покровном стекле) обрабатывают конъюгированной с флуоресцеином антивирусной сывороткой {аф). Избыток ар отмывают и клетки просматривают с помощью микроскопа, снабженного сильным источником света (лампа с парами ксенона или ртути) и фильтром, задерживающим лучи всех длин волн, кроме коротковолновых.

иммунофлуоресценция вирусов

Между объективом и окуляром вводят дополнительные фильтры, которые поглощают все синие и ультрафиолетовые лучи; таким образом, препарат выглядит черным, за исключением тех мест, где флуоресцеин излучает зелено-желтый свет.

Непрямая иммунофлуоресценция (А—а—гф). Для этого метода, иногда называемого методом «сэндвича», характерно то, что антивирусные антитела (а), не меченные красителем, выполняют роль «начинки в сэндвиче». Они связываются как с антигеном (А), так и с антигаммаглобулином, конъюгированным с флуоресцеином (гф), который добавляют в конце реакции. Например, если в качестве антивирусной сыворотки берут сыворотку человека в период выздоровления, то целесообразно использовать глобулин (г), полученный путем иммунизации коз или кроликов нормальным человеческим глобулином.

Непрямой метод иммунофлуоресценции более чувствителен, чем прямой, и, что особенно важно в диагностике, для тестирования взаимодействия любого антигена с соответствующими антителами, образующимися в организме человека, необходим лишь один вид меченого реагента, например конъюгированный с флуоресцеином козий у-глобулин против глобулина человека.

Иммунофлуоресценция комплемента (А—а—К—гф). После того как комплекс антиген—антитело свяжет комплемент, в систему вносят конъгогированнкй с флуоресцеином иммуноглобулин против комплемента. Метод сопряжен с рядом трудностей и используется не так широко, как описанные выше варианты.

Иммунофлуоресценция обладает двумя основными преимуществами по сравнению с другими серологическими методами. В исследовательской работе этот метод позволяет определить, какие клетки в органе содержат вирус, и установить локализацию специфических вирусных антигенов в зараженной клетке. Несмотря на то что трудности, обусловленные неспецифической флуоресценцией, несколько задерживают широкое внедрение метода в диагностических лабораториях, он имеет большие возможности для ускоренной идентификации вируса как непосредственно в материале, полученном при биопсии или аутопсии, так и после пассирования вируса в культуре клеток.

- Читать далее "Радиоиммунологические методы выявления вирусов. Техника радиоиммунных методов"

Оглавление темы "Выявление вирусов":
1. Критерии чистоты вирусных препаратов. Радиоактивные изотопы в изучении вирусов
2. Электронная микроскопия вирусов. Гибридизация вирусов
3. Гибридизация ДНК вирусов. Нуклеиновые кислоты вирусов
4. Диагностика вирусных нуклеиновых кислот. Белки вирусов
5. Белковый состав морфологических субъединиц вирусов. Оболочки и ферменты вирусов
6. Антитела и антигены вирусов. Нейтрализация вирусов
7. Торможение гемаглютинации вирусов. Выявление вирусов диффузией в геле
8. Связывание комплемента для выявления вирусов. Техника связывания комплемента
9. Иммунофлуоресценция вирусов. Виды иммунофлуоресценции вирусов
10. Радиоиммунологические методы выявления вирусов. Техника радиоиммунных методов